Негизги айырмасы – Жылуу жана муздак трипсинация
Жылуу жана муздак трипсинация жаныбарлардын клеткаларын өстүрүүдө клеткаларды ферменттик дезагрегациялоодо колдонулган эки ыкма. Жылуу жана муздак трипсинациянын ортосундагы негизги айырма, аттары айтып тургандай, трипсин клеткалык дезагрегация үчүн кошулган температурага жараша болот. Жылуу трипсиндөө жогорку температура шарттарында (36,5 – 37 0C) ишке ашат, ал эми муздак трипсинация төмөнкү температурада ишке ашат.
Жаныбарлардын клеткаларын баштапкы клетка өстүрүү процессинде үч негизги ыкма колдонулат жана алар ийгиликтүү болгонун далилдешти. Үч ыкмага клеткалардын механикалык дезагрегациясы, клеткалардын ферменттик дезагрегациясы жана негизги экспланттык техника кирет. Клеткалардын изоляциясына алып баруучу клеткалардын ферментативдик дезагрегациясы протеинди бузуучу фермент трипсин тарабынан ишке ашырылат. Ошондуктан, бул процесс трипсинация деп аталат. Трипсинация эки башка шартта жасалышы мүмкүн, атап айтканда Жылуу Трипсинация жана Муздак Трипсинация. Жылуу трипсиндөө - бул 36,5 – 37 0C температурада жылуу шарттарда клеткаларды трипсин менен дарылоо ыкмасы. Муздак трипсинизация - бул өтө төмөн температураны кармап турган музда муздак шарттарда ишке ашкан трипсинди дарылоо процесси.
Жылуу трипсинация деген эмне?
Трипсинацияны клеткалардын негизги клетка маданиятын өндүрүү үчүн бөлүп алуу үчүн клеткалык компоненттерди ажыратууга болот. Трипсин - белоктун деградациясынын ферменти жана трипсинацияда колдонулган фермент аралашмасы чийки экстракты же тазаланган продукту болушу мүмкүн. Чийки экстракты белок лизисинде жана клетканын ыдыратылышында натыйжалуураак деп айтылат, анткени анын курамында башка деградациялык ферменттер бар.
Жылуу трипсинация жогорку температура шарттарында ишке ашкан клеткаларды дезагрегациялоо үчүн эң көп колдонулган ферменттик ыкма. Трипсинациялоо жолу менен дарылоодон мурун, керектүү кыртыш майда бөлүктөргө майдаланат. Бул жеңил дезагрегация процессин жеңилдетет. Майдаланган кыртыш андан кийин Dissection Basal S alt каражаты деп аталган атайын каражатта жуулат.
Жуу кадамы аяктагандан кийин клеткалар трипсин болгон активдүү ферментти камтыган колбага айланат. Бул ыкма жылуу трипсинация протоколун билдиргендиктен, трипсин болжол менен 37 0C температурада болжол менен төрт саатка жайгаштырылат.
01-сүрөт: Трипсин
Мазмуну протоколдун оңой болушу жана ажыратуу процессин тездетүү үчүн центрифугалоо ыкмаларын колдонуу менен аралаштырылат жана козголот. Сунушталган убакыт жеткенден кийин, клеткалар супернатанттан алынышы мүмкүн. Андан кийин супернатанттан алынган клеткалар белгилүү бир температурада жана убакытта инкубацияланат.
Муздак трипсинация деген эмне?
Муздак трипсинация - бул муздак шарттарда ишке ашкан трипсинациянын башка түрү. Бул ыкмада майдаланган жана жуулган клеткалар муздун үстүндөгү флакондорго салынып, анан трипсинге чыланган. Чылоо мөөнөтү бир топ узагыраак – болжол менен 6 – 24 саат.
Чыдоо процедурасы аяктагандан кийин, трипсин клетка лизатынан чыгарылат жана кыртыштын бөлүктөрүн андан ары 37 0C температурасында болжол менен 20 – 30 мүнөт инкубациялайт. Клеткалардын дезагрегациясы кыртыш аралашмасын кайра-кайра пиптинг аркылуу ишке ашырылат. Бул клеткалардын мембранадан ажырап, супернатантка келишине мүмкүндүк берет. Клеткалар супернатантта болгондон кийин, алар инкубацияланат жана каалаган температурада жана убакыт аралыгында өстүрүлөт.
Муздак трипсинация ыкмасы бир нече артыкчылыктарга ээ
- Жашоого жөндөмдүү клеткалардын түшүмдүүлүгү жогору, анткени клетканын зыяны минималдуу. Центрифугалоо кадамдарын колдонбоо аркылуу клетканын зыяны азайтылат.
- Өтө ыңгайлуу ыкма.
- Азыраак эмгек талап кылынат.
Муздак трипсинация ыкмасынын негизги чектөөсү - бул чоң көлөмдөрдү бир эле учурда колдонууга болбойт.
Жылуу жана муздак трипсинациянын кандай окшоштуктары бар?
- Жылуу жана муздак трипсиндөө процесстери клеткаларды дезагрегациялоо үчүн трипсин ферментин колдонот.
- Жылуу жана муздак трипсинация процесстери клеткаларды дезагрегациялоо үчүн клетка культурасынын процедураларында колдонулат.
- Жылуу жана муздак трипсинация процедураларында клеткалар супернатанттан алынат.
Жылуу жана муздак трипсинациянын ортосунда кандай айырма бар?
Жылуу жана муздак трипсинация |
|
| Жылуу трипсинация - бул 36,5 – 37 температурада жылуу шарттарда клеткаларды трипсин менен дарылоо ыкмасы 0. | Муздак трипсиндөө - бул өтө төмөн температураны кармап турган музда муздак шарттарда ишке ашкан трипсинди дарылоо процесси. |
| Протокол | |
| Майдаланган кыртыш кесимдери процедура бою тынымсыз 37 0C сакталат. | Майдаланган кыртыштар адегенде муздак температурада сакталат, андан кийин 37 0. |
| Температура | |
| Жылуу трипсинация 36,5 – 37де болот 0 | Муздак трипсинация муздак суук температурада болот. |
| Сарпталган убакыт | |
| Бардык процесс (болжол менен 4 саат) үчүн азыраак убакыт талап кылынат. | Муздак трипсинация үчүн көбүрөөк убакыт талап кылынат (болжол менен 6 – 24 саат). |
| Жашоого жөндөмдүү клеткалардын кирешеси | |
| Жылуу трипсинация аз. | Муздак трипсинацияда жогорку. |
| Центрифуганы колдонуу | |
| Жылуу трипсинацияда клеткаларды дезагрегациялоо үчүн центрифугалоо талап кылынат. | Муздак трипсинацияда центрифугалоо талап кылынбайт. |
| Трипсинация үчүн кыртыштын баштапкы саны | |
| Көбүрөөк сандагы кыртыш жылуу трипсинацияда колдонулушу мүмкүн. | Муздак трипсинацияда кыртыштын азыраак көлөмүн колдонсо болот. |
| Клеткага зыян | |
| Жылуу трипсинацияда центрифугалоодон улам жогору. | Муздак трипсинациядан улам азыраак. |
Кыскача – Жылуу жана муздак трипсинация
Трипсинизация - бул клетканы өстүрүү процессинде баштапкы клетка культураларын ажыратуу жана даярдоо үчүн протеинди бузуучу фермент трипсинди колдонуу ыкмасы. Процедура учурунда колдонулган температуранын негизинде трипсинациянын эки негизги ыкмасы бар. Алар жылуу жана муздак трипсинация болуп саналат. Жылуу трипсиндөө 37 0C температурада жүргүзүлөт, ал эми муздак трипсинация муздай муздак шарттарда жүргүзүлөт. Муздак трипсинациялоонун бүтүшү көбүрөөк убакытты талап кылса да, ал жашоого жөндөмдүү клеткалардын түшүмдүүлүгү жогору деп айтылат. Бул күчтүү центрифугалоо кадамдарын колдонбогондуктан, муздак трипсинацияда клетканын зыяны азайтылгандыгына байланыштуу. Бул жылуу жана муздак трипсинациянын ортосундагы айырма.
