RP HPLC менен HIC ортосундагы негизги айырма RP HPLC көбүрөөк полярдуу мобилдүү фазаны жана азыраак полярдык стационардык фазаны колдонот. Ал эми HIC гидрофобдук стационардык фазаны колдонот, ал гидрофобдук молекулалардын ага жабышып калышына мүмкүндүк берет.
Хроматография аралашманы анын компоненттерине бөлүүгө жардам берген аналитикалык ыкма. Биринчиден, биз эритмеге бөлүнүүчү үлгүнү эритишибиз керек. Бул эритме-зат аралашмасы кыймылдуу фаза деп аталат. Андан кийин кыймылдуу фаза стационардык фаза деп аталган башка материал аркылуу өтөт. Стационардык фаза компоненттердин бөлүнүшүн аныктайт. Бөлүнүү материалдын кыймылдуу фаза менен стационардык фазага бөлүнүшүнө байланыштуу болот.
RP HPLC деген эмне?
RP HPLC термини «Тескери фазалык жогорку натыйжалуу суюктук хроматографиясы» дегенди билдирет. Бул аралашмадагы компоненттерди гидрофобдукка жараша бөлүүнү камтыйт. Мобилдик фазадагы гидрофобдук компоненттер стационардык фазадагы иммобилизацияланган гидрофобдук лиганддар менен байланышат, ал эми гидрофильдик компоненттер стационардык фазанын бетине жабышпай туруп, стационардык фазадан өтүшөт.
01-сүрөт: HPLC аппараты
Мындан тышкары, бул ыкма башка хроматографиялык ыкмаларга салыштырмалуу көбүрөөк кайталанууга жөндөмдүү жана кеңири колдонуу мүмкүнчүлүгүн көрсөтөт. Ошондуктан, биз лабораторияларда бул ыкманы бардык HPLC ыкмаларынын 75% дан ашыгы үчүн колдонобуз. Көбүнчө биз мобилдик фаза катары аралашкан полярдуу органикалык эриткич менен суунун суу аралашмасын колдонобуз. Ошентип, ал эритмедеги гидрофобдук компоненттердин стационардык фазанын бетине бекитилишин камсыз кылат.
HIC деген эмне?
HIC термини гидрофобдук өз ара аракеттенүү хроматографиясын билдирет. Бул тескери фазадагы HPLC бир түрү жана бул ыкма негизинен белоктор сыяктуу чоң биомолекулаларды бөлүү үчүн колдонулат. Бул ыкмада биз биомолекуланын үлгүсүн алуу үчүн суулуу чөйрөнү колдонушубуз керек. Себеби органикалык эриткичтер белоктордун денатурацияланышына алып келиши мүмкүн. Мындан тышкары, бул ыкма стационардык фазанын бир аз гидрофобдук бети менен чоң молекулалардын ортосундагы өз ара аракеттенүүнү колдонот. Андан тышкары, биз үлгүдөгү туздун жогорку концентрациясын колдонушубуз керек, анткени ал белоктун таңгакта кармалышын шарттайт; бул процесс туздоо деп аталат. Туздун концентрациясын акырындык менен азайтуу менен биомолекулаларды гидрофобдугуна жараша өз-өзүнчө элюта кыла алабыз.
Адатта, бул ыкма ион алмашуу хроматографиясына карама-каршы шарттарды колдонот. Бул техникада, биринчиден, үлгүдөгү эриген заттын эритүүсүн азайтуу үчүн колонка аркылуу буфердик эритмени өткөрүшүбүз керек. Ал белоктун гидрофобдук аймактарын ачыкка чыгарат. Бирок, молекула көбүрөөк гидрофобдук болгондо, байланышты камсыз кылуу үчүн азыраак туз талап кылынат. Бул жерде алгач азыраак гидрофобдук эритмелер, ал эми туздун концентрациясынын өзгөрүшүнө ылайык, көбүрөөк гидрофобдук эритмелер эң акыркы элюцияланат.
RP HPLC жана HIC ортосунда кандай айырма бар?
Хроматография аралашмадагы компоненттерди бөлүү үчүн аналитикалык ыкма. RP HPLC жана HIC эки адистештирилген хроматографиялык ыкмалар. RP HPLC менен HIC ортосундагы негизги айырма RP HPLC көбүрөөк полярдуу мобилдүү фазаны жана азыраак полярдык стационардык фазаны колдонот, ал эми HIC гидрофобдук стационардык фазаны колдонот, ал гидрофобдук молекулалардын ага жабышып калышына мүмкүндүк берет.
Төмөнкү инфографика RP HPLC менен HIC ортосундагы айырманы жалпылайт.
Корытынды – RP HPLC менен HIC
Хроматография аралашмадагы компоненттерди бөлүү үчүн аналитикалык ыкма. RP HPLC жана HIC эки адистештирилген хроматографиялык ыкмалар. RP HPLC менен HIC ортосундагы негизги айырма RP HPLC көбүрөөк полярдуу мобилдүү фазаны жана азыраак полярдык стационардык фазаны колдонот, ал эми HIC гидрофобдук стационардык фазаны колдонот, ал гидрофобдук молекулалардын ага жабышып калышына мүмкүндүк берет.
