ПТР vs Реалдуу убакыттагы ПТР
ПТР же Полимераздык чынжыр реакциясы - заманбап молекулярдык биологиядагы революциялык ачылыш, аны биринчи жолу 1983-жылы химик Кари Муллис иштеп чыккан. Ал татаал ДНКдагы бир ырааттуулукту анализдөө үчүн күчөтүүгө мүмкүндүк берет. ПТРдин негизги идеясы – ДНК ырааттуулугунун карама-каршы тилкелерин толуктаган эки праймер бири-бирине багытталган; праймерлер бири-бирин башка праймерди камтыган кошумча жиптерди чыгарышат. Демек, натыйжада эки праймердин ортосунда жаткан ДНКга туура келген ырааттуулуктун көп саны пайда болот. ДНК-полимераза ферменти ПТРдеги праймерлерди узартуу үчүн колдонулат. ДНК-полимераза термостубалдуу фермент жана ал ДНК шаблонунун денатурациясы үчүн колдонулган жогорку температурада (94-95 °C) жашоого жөндөмдүү.
ПЦР үч этапты камтыйт, атап айтканда, денатурациянын кайталанма раунддары, праймерлердин күйгүзүлүшү жана ДНКнын синтези. Бул реакцияны аткаруу үчүн температураны тез жана так өзгөртүүгө программаланган термоциклдик машина колдонулат. ПТРдин колдонулушу кылмыш иликтөөлөрү, ДНК манжа изи, патогендерди аныктоо жана адамдын алгачкы түрүнүн ДНКсын талдоо болуп саналат.
Кадимки ПТР деген эмне?
Кадимки ПТРдин үч негизги баскычы бар, атап айтканда; ДНКны күчөтүү баскычы, ПТРди бөлүү жана продуктуларды аныктоо. ДНК сегменттерин бөлүү, адатта, агароз гел электрофорези менен жүзөгө ашырылат. Андан кийин продуктылар этейдуим бромид менен боёлот. Акыр-аягы, аныктоо UV нуру астында гелдердин үстүнө тилкелерди визуализациялоо аркылуу ишке ашат. Демек, кадимки ПТРдин акыркы натыйжалары сандар менен көрсөтүлбөйт. Адатта кадимки ПТР бир гана параметрди аныктай алат.
Реалдуу ПТР деген эмне?
Реалдуу убакыттагы ПТР продуктулардын күчөшүн аныктай алат, анткени өнүмдөр синтезделет. Технологиянын өнүгүшү менен ПЦР өзгөчө тамак-аш азыктарында бактерияларды аныктоо жана аныктоо үчүн абдан популярдуу ыкма болуп калды. Реалдуу убакыттагы ПТР флуоресценттүү боёк системасын жана флуоресценттик аныктоо жөндөмү менен жабдылган термоциклди колдонот.
Кадимки ПТР менен реалдуу убакыттагы ПТРдин ортосунда кандай айырма бар?
• Кадимки ПТР көбүрөөк убакытты талап кылат, анткени ал күчөтүлгөн ПТР продуктуларын талдоо үчүн гел электрофорезин колдонот. Ал эми реалдуу убакыттагы ПТР азыраак убакытты талап кылат, анткени ал реакциянын алгачкы фазаларында күчөтүүлөрдү аныктай алат.
• Реалдуу убакыттагы ПТР ПТРдин экспоненциалдык өсүү фазасында маалыматтарды чогултат, ал эми салттуу ПТР реакциянын Аяктоо чекитинде маалыматтарды чогултат.
• Кадимки ПТРдин акыркы чекитинин натыйжалары так эмес болушу мүмкүн, бирок реалдуу убакыттагы ПТРдин натыйжалары абдан так.
• Реалдуу убакыттагы ПТР кадимки ПТРге караганда сезгич.
• Кадимки ПТР өтө начар резолюцияга ээ, ал эми реалдуу убакыттагы ПТР жогорку чечилиштен улам өтө аз өзгөрүүлөрдү аныктай алат.
• Кадимки ПТРдин акыркы чекитинин диапазону кыска динамикалык диапазонго ээ, ал эми реалдуу убакытта ПТР аныктоонун динамикалык диапазону кең.
• Кадимки ПТРден айырмаланып, автоматташтырылган аныктоо ыкмалары реалдуу убакыт ПТРде табылган.
• Кадимки ПТР реалдуу убакыттагы ПТРге караганда өтө татаал жана эмгекти көп талап кылат.
• Реалдуу убакыттагы ПТРден айырмаланып, кадимки ПТР өлгөн жана тирүү бактерияны айырмалай албайт.
• Реалдуу убакыттагы ПТР өнүмдөрдү аныктоо үчүн флуоресценттик боёк системасын колдонот, ал эми кадимки ПТР агароздук гел чөйрөсүндөгү тилкелерди визуалдаштыруу үчүн этидий бромидин жана UV нурун колдонот.
