Негизги айырма – YAC vs M13 фаг вектор
ДНКны клондоо - бул организмдердин маанилүү ДНК фрагменттеринин көбөйүшүнө мүмкүндүк берген маанилүү процесс. Ал кабыл алуучу организмге айланган рекомбинантты ДНКны түзүү үчүн белгилүү ДНКны вектордук ДНК менен бириктирүүнү талап кылат. Вектор башка клеткага же организмге бөтөн генетикалык материалды алып өтүү үчүн транспорт каражаты катары өзүн алып жүргөн ДНК молекуласы. Ал кабыл алуучу организмдин ичинде репликациялоого жана рекомбинантты ДНКнын бир нече көчүрмөсүн чыгарууга жөндөмдүү болушу керек. ДНК клондоштурууда колдонулган векторлордун ар кандай түрлөрү бар. Ачыткы жасалма хромосома (YAC) жана M13 фаг вектору алардын эки түрү болуп саналат. YAC менен M13 фаг векторунун ортосундагы негизги айырма, YAC ачыткы клеткаларында репликацияланган жасалма хромосома, ал эми M13 фаг вектору E Coli клеткаларында репликацияланган M13 бактериофагынын бир саптуу тегерек ДНКсы.
YAC вектору деген эмне?
YAC – бул жасалма жол менен курулган хромосома, ал чет элдик ДНКнын чоң сегментин алып жүрүүгө жана ачыткы клеткаларынын ичинде репликациялоого жөндөмдүү. Ал репликация жана туруктуулук үчүн зарыл болгон центромера, теломера жана автономдуу репликациялоочу тизмектерге ээ. YAC ошондой эле клондоштуруунун эффективдүү вектору болушу үчүн тандалма маркерди же маркерлерди жана чектөө сайттарын камтышы керек. 1000 кбдан 2000 кбга чейинки чоң ырааттуулуктарды YACга салып, ачыткыга өткөрсө болот.
01-сүрөт: YAC Vector
M13 Phage Vector деген эмне?
Бактериофаг M13 - E Coli инфекциясын жуктуруп, көбөйүүчү вирус. M13 бактериофагынын геному кичинекей, болжол менен 6,7 кб. Бул бир катарлуу, тегерек жана оң маанидеги ДНК. Бул вирус өзгөчө E Coli бактерияларын F pilus аркылуу жугат. Бактерияга ssDNA киргенден кийин, ал өзүнүн комплементарлык тилкесин синтездеп, dsDNA же M13 репликативдик формасына (RF) айланат. RF кабыл алуучу организмдин ичинде өзүн плазмидадай алып жүрүшү мүмкүн. dsDNA E Coli ичинде репликацияланат жана жаңы фагдарды камтыган ssDNA өндүрөт. Бул жаңы фагдар E Coliден тынымсыз чыгарылып, кабыл алуучу клетканы өлтүрбөйт. Бирок инфекция E Coli көбөйүшүн жайлатат. dsDNA бактериялык клеткалардан алынган жана ДНК клондоштурууда вектор катары колдонулушу мүмкүн. Алар M13 фаг векторлору катары белгилүү. Аларды оңой манипуляциялоого жана плазмиддик векторлорго окшош колдонууга болот.
Бул M13 фагдардын инфекциясынын мүнөздүү жөндөмдүүлүгү гендерди клондоштурууда вектор катары колдонуу үчүн жакшы квалификация катары кызмат кылат. M13 векторун иштеп чыгууда анын геномуна бир нече элементтерди киргизүү керек. Алар lac репрессор (lac I) протеининин гени, lac Z генинин оператор-проксималдык аймагы, лак промоутору жана көп клондоочу сайт (полилинкер). M13 dsDNA вектор катары колдонулганда, аны плазмиддик вектор катары кароого болот. Бирок, ssDNA M13 колдонуу ДНК секвенирлөөдө жана сайтка багытталган мутагенезде артыкчылыктарга ээ.
M13 фаг вектору lacZ аймагында бир нече клондоштуруучу жерлерге ээ болгондуктан, рекомбинацияланган векторлорду IPTG жана X-Gal камтыган агар плиталарында көк/ак колония скрининги аркылуу оңой эле аныктоого болот. Пластинкаларда пайда болгон көк бляшкаларда рекомбинацияланган фагдар жок. Ошондуктан, клондоо максатында кошумчалары бар фагдарды тандаса болот.
Сүрөт 02: M13 бактериофаг
YAC менен M13 фаг векторунун ортосунда кандай айырма бар?
YAC vs M13 фаг вектор |
|
| YAC – генетикалык инженерияланган хромосома, ал бөтөн ДНКнын чоң сегментин алып жүрүүгө жана ачыткы клеткаларынын ичинде репликациялоого жөндөмдүү. | M13 фаг вектору – M13 бактериофаг тарабынан иштелип чыккан вирустук вектор, ал E Coliге чет элдик ДНКны киргизүү үчүн колдонулат. |
| Максат | |
| YACлар геномдук ДНКнын чоң фрагменттерин ачыткыга клондоо үчүн иштелип чыккан. | M13 фаг векторлору E Coliге чет элдик ДНКны киргизүү үчүн колдонулат. |
| Кыстаруу узундугу | |
| YAC мегабаза өлчөмүндөгү геномдук кошумчаларды камтышы мүмкүн (1000 кб – 2000 кб). | Кыстармалардын өлчөмү болжол менен 1500 бит/сек. |
| Курулуш | |
| YAC ДНКсын бүтүн бойдон тазалоо кыйын жана YAC вектор системасын түзүү үчүн жогорку концентрацияны талап кылат. | Ал циклдик фотосинтетикалык электрон чынжыр аркылуу пайда болот. |
| Туруктуулук | |
| YAC туруксуз. | M13 фагдары оңой алынышы мүмкүн. |
| Размер | |
| Ферменттер чоңураак молекулалар. | M13 фагдары YACга караганда туруктуу. |
Кыскача – YAC vs M13 фаг вектор
YAC – ачыткы клеткаларына генетикалык материалдын чоң сегменттерин киргизүү үчүн ачыткы хромосомасынын белгилүү бир аймагын колдонгон жасалма жол менен курулган вектордук система. M13 фаг вектору – M 13 бактериофагынан алынган вектордук система, ал кабыл алуучу организм катары E coli колдонот. Бул YAC менен M13 Phage Vector ортосундагы негизги айырма. Экөө тең рекомбинанттык ДНК технологиясында жана ген клондоштурууда бирдей пайдалуу.
