Түз жана кыйыр иммунофлуоресценциянын негизги айырмасы - түз иммунофлуоресценция кызыккан объектиге каршы иштеген бир антитело колдонот, ал эми кыйыр иммунофлуоресценция кызыктырган бутаны белгилөө үчүн эки антитело колдонот.
Иммунофлуоресценция же клетканы сүрөттөө – бул белгилүү бир максаттуу антигенди флюорофор менен белгилөө үчүн колдонулган ыкма. Бул жерде флюорофор жарык дүүлүккөндө жарыкты кайра чыгара ала турган флуоресценттүү химиялык кошулма. Флюорофор максаттуу антиген менен байланышканда, үлгүдөгү максаттуу молекуланы аныктоого мүмкүндүк берет. Аны андан ары сүрөттөө үчүн, антиген белгилүү бир антитело менен байланышканда, аны флуорофорлор менен конъюгациялоого болот. Демек, флуоресценттик микроскоптун астында байкоо жүргүзүүдө үлгүдөгү максаттуу антигендин бар экендигин аныктоо оңой.
Мындан тышкары, иммунофлуоресценциянын эки түрү бар; түз жана кыйыр иммунофлуоресценция. Түз жана кыйыр иммунофлуоресценциянын ортосундагы айырма негизинен колдонулган антителолордун санына жана fluorophore конъюгациясына байланыштуу. Башкача айтканда, түз иммунофлуоресценцияда флюорофор негизги антитело менен түз конъюгацияланат, ал эми кыйыр иммунофлуоресценцияда флюорофор экинчилик антитело менен конъюгацияланат.
Түз иммунофлуоресценция деген эмне?
Immunofluorescence атайын максаттуу антигендерди аныктоо үчүн антителолорду колдонот. Түз иммунофлуоресценция иммунофлуоресценциянын эки түрүнүн бири болуп саналат. Түздөн-түз иммунофлуоресценцияда бир антитело (баштапкы антитело) кирет жана флюорофор негизги антитело менен түздөн-түз конъюгацияланат. Антителону максаттуу антиген менен байланыштыргандан кийин, флуорофор флуоресценттик микроскоп менен аныктай турган флуоресценцияны чыгарат.
01-сүрөт: Түздөн-түз иммунофлуоресценция
Бирок түз иммунофлуоресценция кымбат ыкма, анткени экинчилик антителолорго салыштырмалуу негизги конъюгацияланган антителолор кымбат. Ошентсе да, бул кошумча кадамды, демек, кыскараак техниканы камтыбайт. Мындан тышкары, спецификалык эмес байланыштар түздөн-түз иммунофлуоресценцияда азаят. Демек, түрлөрдүн кайчылаш реакциясы төмөн. Бирок аныктоодо түз иммунофлуоресценциянын сезгичтиги кыйыр иммунофлуоресценцияга салыштырмалуу начар.
Кыйыр иммунофлуоресценция деген эмне?
Кыйыр эмес иммунофлуоресценция – иммунофлуоресценциянын экинчи түрү, ал максаттуу антигенди белгилөөдө биринчилик жана экинчилик антитело сыяктуу антителолордун эки түрүн камтыйт. Бул ыкмада флюорофор экинчилик антитело менен конъюгацияланат. Демек, бул ыкма кошумча кадамды камтыйт.
02-сүрөт: Иммунофлуоресценция
Бирок, бул ыкмада сезгичтик жогору, анткени бир нече флюорофорлар экинчилик антителолорго конъюгацияланышы мүмкүн жана бул аныктоону жеңилдетет. Андан тышкары, кыйыр иммунофлуоресценция арзаныраак, анткени экинчилик антителолордун конъюгациясы арзаныраак жана оңой. Түз иммунофлуоресценцияга салыштырмалуу кыйыр ыкмада түрлөрдүн кайчылаш реакциясы жогору.
Түз жана кыйыр иммунофлуоресценциянын кандай окшоштуктары бар?
- Алар иммунофлуоресценттик техниканын эки түрү.
- Негизги антителолор жана флюорофор эки ыкмага тең катышат.
- Ошондой эле антиген-антитело реакциясы эки ыкмада тең болот.
- Мындан тышкары, түз жана кыйыр иммунофлуоресценция антигенди аныктоо үчүн флуоресценттик микроскопту колдонот.
Түз жана кыйыр иммунофлуоресценциянын ортосунда кандай айырма бар?
Иммунофлуоресценция колдонулган антителолор менен флюорофор конъюгациясынын негизинде түз же кыйыр болушу мүмкүн. Түздөн-түз иммунофлуоресценцияда флюорофор негизги антитело менен конъюгацияланат, ал бул техниканы камтыган жалгыз антитело. Андан айырмаланып, кыйыр иммунофлуоресценцияда флюорофор экинчилик антитело менен конъюгацияланат, бул техникага катышкан антителолордун эки түрүнүн бири. Демек, түз жана кыйыр иммунофлуоресценциянын негизги айырмасы - флюорофор менен конъюгацияланган антитело түрү.
Төмөнкү инфографика түз жана кыйыр иммунофлуоресценциянын ортосундагы айырманы жанаша салыштырууну камсыз кылат.
Кыскача – Түз жана Кыйыр Иммунофлуоресценция
Иммунофлуоресценция - бул үлгүдөгү белгилүү антигендердин бар экендигин аныктоо үчүн колдонулган ыкма. Бул ыкма атайын антителолорду колдонот. Ошондуктан, бул жерде антителолор флуоресценттик микроскоптун жардамы менен аларды аныктоо үчүн флюорофорлор менен конъюгацияланат. Мындан тышкары, иммунофлуоресценциянын эки түрү бар: түз жана кыйыр иммунофлуоресценция. Түздөн-түз иммунофлуоресценция бир антителону жана бул антитело менен түз конъюгацияланган флюорофорду камтыйт. Кыйыр иммунофлуоресценция эки антителону камтыйт; баштапкы жана экинчилик жана флюорофор экинчилик антитело менен конъюгацияланган. Бир нече экинчилик антителолор негизги антитело менен жана бир нече флуорофорлор экинчилик антитело менен туташа алгандыктан, кыйыр иммунофлуоресценция түз методго караганда сезгич ыкма болуп саналат. Мындан тышкары, кыйыр ыкма түз ыкмага караганда арзаныраак. Ошентип, бул түз жана кыйыр иммунофлуоресценциянын ортосундагы айырма.
