Негизги айырмасы – Стекинг гели менен бөлүүчү гел
Стекинг гели жана бөлүүчү гель терминдери SDS-PAGE техникасын түшүндүрүүдө колдонулат. SDS-PAGE же натрий додецилсульфаты-полиакриламиддик гель электрофорези - бул белок молекулаларын молекулалык салмагына жараша бөлүү үчүн колдонулган лабораториялык ыкма. Техниканын артындагы теория ар түрдүү молекулярдык салмактагы белоктордун ар кандай миграция ылдамдыгын көрсөтөт; төмөн молекулалуу молекулалар тезирээк, ал эми жогорку молекулалуу молекулалар жай көчүп. Миграция үчүн каражат гель болуп саналат. Стекинг гели жана бөлүүчү гел деп аталган гелдердин эки түрү бар. Стектөөчү гел менен бөлүүчү гелдин ортосундагы негизги айырма, топтоо гелинин рНы 6,8, ал эми бөлүүчү гелдин рНы 8,8.
Стекинг гели деген эмне?
Стекинг гели - SDS-PAGE техникасында көбүрөөк концентрацияланган чечүүчү гелдин (бөлүүчү гелдин) үстүнө жайгаштырылган аз концентрациялуу полиакриламиддик гель. Стекинг гели электрофорездин чечүүчүлүгүн жакшыртуу үчүн колдонулат. Резолюция үлгүдөгү протеиндерге таасир этүүчү гелдин жана чечүүчү гелдин концентрациясынын ортосундагы айырмадан улам жогорулайт. Стекинг гелинде полиакриламиддин концентрациясы төмөн болгондуктан, тешикчелердин көлөмү жогору. Бул ошондой эле бөлүнүүнү көбөйтүүгө жардам берет.
Стекинг гели 7%га жакын полиакриламидден турган чоң тешикчелери бар борпоң полиакриламиддик гель. Бул тешикчелер чоң протеин молекулалары үчүн олуттуу тоскоолдук катары кызмат кылбайт. Демек, бул гел ошол белоктордун мобилдүүлүгүнө бир аз таасир этет. Бул белокторду эки гелдин ортосуна топтоо аркылуу кыймылдуулугуна жана өлчөмүнө жараша бөлүнөт.
01-сүрөт: SDS-PAGE акриламиддик гел
Стекинг гелинин рНы 6,8. Анын рН 2 рН бирдигине чечүүчү гелге караганда кислоталуу. Бул рН төмөнкү иондук күчтү билдирет, демек, электрдик каршылык жогору. Бул гелдеги башка заряддуу бөлүкчөлөргө караганда белоктордун мобилдүүлүгүн жаратат.
Бөлүүчү гель деген эмне?
Сепарирлөөчү гел же SDS-PAGEtechnique резолюциялоочу гели – бул аз концентрациялуу стекердик гелдин үстүнө коюлган жогорку концентрациялуу полиакриламиддик гел. Бөлүүчү гелдин курамында көп сандагы полиакриламид бар (10%). Бул гелдин рН деңгээли pH=8,8 катары сакталып турат, бул топтоо гелине караганда жогорку рН деңгээли.
02-сүрөт: Гель электрофорез аппараты
Белок молекулалары бөлүүчү гелге жеткенде, ал молекулалардын миграциясы басаңдайт, анткени бөлүүчү гел белок молекулаларынын кыймылы үчүн олуттуу тоскоол боло ала турган кичинекей тешикчелери бар жогорку концентрациядагы гель болуп саналат.. Бул жайлатуу башка белоктордун акырындык менен миграциясын кармап калууга мүмкүндүк берет, натыйжада эки гелдин ортосунда тар, концентрацияланган тилке пайда болот.
Стекинг гели менен бөлүүчү гелдин ортосунда кандай байланыш бар?
Стектөөчү гелдин жана бөлүүчү гелдин экөө тең бир аппаратта колдонулат
Стектөөчү гел менен бөлүүчү гелдин ортосунда кандай айырма бар?
Стекинг гели жана бөлүүчү гел |
|
| Стекинг гели - SDS-PAGE техникасында көбүрөөк концентрацияланган чечүүчү гелдин (бөлүүчү гел) үстүнө жайгаштырылган аз концентрациялуу полиакриламиддик гель. | Сепарирлөөчү гел же SDS-PAGE техникасынын чечүүчү гели – бул төмөн концентрациялуу стекердик гелдин үстүнө коюлган жогорку концентрациялуу полиакриламиддик гель. |
| Жайгаштыруу | |
| Стекинг гели чечүүчү (бөлүүчү) гелге коюлган. | Бөлүрүүчү гел гель электрофорези үчүн колдонулган идиштин түбүнө коюлат. |
| Концентрация | |
| Стекинг гелинин концентрациясы жогору. | Ажыратуучу гелдин концентрациясы аз. |
| Полиакриламид мазмуну | |
| Стекинг гели болжол менен 7% полиакриламидди камтыйт. | Бөлүрүүчү гелде болжол менен 10% полиакриламид бар. |
| pH | |
| Стектөөчү гелдин рНы 6,8. | Ажыратуучу гелдин рНы 8,8. |
| Тешикчелердин өлчөмү | |
| Чоң тешикчелердин өлчөмдөрү сток гелинде бар. | Ажыратуучу гелде кичинекей тешикчелер бар. |
| Токтом | |
| Стектөөчү гел жакшыраак чечмеленет. | Ажыратуучу гел начар чечмеленет. |
Кыскача – Стекинг гели жана бөлүүчү гел
Стекинг гели жана бөлүүчү гел - бул берилген үлгүдөгү белок молекулаларын жакшыраак бөлүү үчүн колдонулган полиакриламиддик гелдердин эки түрү. Стектөөчү гел менен бөлүүчү гелдин ортосундагы айырмачылык сток гелинин рНы 6,8, ал эми бөлүүчү гелдин рНы 8,8.
