Хроматофокус менен изоэлектрдик фокустоонун негизги айырмасы хроматофокустоо ион алмашуу чайырларын колдонгон колонна хроматография ыкмасынын бир түрү, ал эми изоэлектрдик фокустоо иммобилизацияланган рН градиент гелдерин колдонгон электрофорез техникасынын бир түрү.
Хроматофокустоо жана изоэлектрдик фокустоо белокторду изоэлектрдик чекиттерине жараша бөлүүчү эки ыкма. Хроматофокус жана изоэлектрдик фокустоо чоң чечүүчү күчкө ээ. Хроматофокустоо - бул жогорку чечилиштеги колонна хроматография ыкмасы, ал эми изоэлектрдик фокустоо - электрофоретикалык бөлүү ыкмасы. Мындан тышкары, изоэлектрдик фокустоо электр талаасын талап кылса, хроматофокустоо электр талаасын колдонбойт.
Хроматофокус деген эмне?
Хроматофокустоо - белокторду изоэлектрдик чекитиндеги айырмачылыктарга жараша бөлүүчү жогорку элюциялык хроматографиянын бир түрү. Бул ион алмаштыруучу чайыр мамычасын жана ички иштелип чыккан рН градиентти колдонот. Изоэлектрдик фокустоодон айырмаланып, хроматофокустоо электр талаасын камтыбайт. Хроматофокус - бул 0,02 рН бирдиги менен айырмаланган өтө окшош молекулаларды чече ала турган күчтүү тазалоо ыкмасы. Ошондуктан, хроматофокустоо абдан окшош компоненттерди бөлүүдө жогорку чечкиндүүлүк талап кылынганда акыркы жылмалоо кадамы катары эң ылайыктуу.
Хроматофокустоодо үлгү колонкага аны баштоо буфери менен аралаштыруу аркылуу колдонулат. Изоэлектрдик чекитинен жогору рН болгон белоктор терс заряддуу жана алар мамычанын жогору жагында калышат, ал эми изоэлектрдик чекитинен төмөн рНда болгон башка белоктор мамычаны ылдый көчүрүшөт. Эң жогорку изоэлектрдик чекитке ээ болгон белок биринчи, ал эми эң төмөнкү изоэлектрдик чекитке ээ болгон белок колонкадан эң акыркы элюцияланат. Бул ыкмага протеиндин түшүшү жана рН градиентинин сызыктуулугу сыяктуу бир нече факторлор таасир этет.
Изоэлектрдик Фокустоо деген эмне?
Изоэлектрдик фокустоо – ар кандай молекулаларды изоэлектрдик чекитинин негизинде бөлүүчү ыкма. Ал электрофокус катары да белгилүү. Бул ыкма көбүнчө бир гелде белок бөлүү үчүн колдонулат. Изоэлектрдик фокустоодо үлгү иммобилизацияланган рН градиентине (IPG) кошулат. IPG гели рН градиенти менен сополимерленген акриламиддик гел матрицасы. Белоктор изоэлектрдик чекиттеринин рН аймагын тапканга чейин катодду көздөй жылат. Протеин таза заряды жок рНга жеткенде миграция токтойт жана стационардык тилке берет. Ошо сыяктуу эле, ар бир белок өзүнүн изоэлектрдик чекитине туура келген рН градиентинин чекитинде тилке берет.
01-сүрөт: Изоэлектрдик фокустоо
Изоэлектрдик фокустоо эки өлчөмдүү гель электрофорезинин биринчи кадамы. Бул ыкмада белоктор адегенде изоэлектрдик фокустоо аркылуу изоэлектрдик чекиттерине жараша бөлүнөт, андан кийин SDS-PAGE аркылуу молекулалык салмагы боюнча бөлүнөт.
Хроматофокус менен изоэлектрдик фокустоо ортосунда кандай окшоштуктар бар?
- Хроматофокустоо жана изоэлектрдик фокустоо эки жогорку чечүүчү ыкма.
- Экөө тең белоктордун изоэлектрдик чекитине негизделген.
- Бул ыкмалар рН градиентин колдонушат.
- Эки процедура тең адамдын гемоглобининин варианттарын мүнөздөйт.
- Алар pI маанилери 0,02 рН бирдигине чейин айырмаланган молекулаларды чече алышат.
Хроматофокус менен изоэлектрдик фокустоонун ортосунда кандай айырма бар?
Хроматофокустоо - белокторду изоэлектрдик чекитине жараша бөлүүчү жогорку чечилиштеги колонна хроматографиясынын ыкмасы. Ал эми изоэлектрдик фокустоо - бул капиллярда пайда болгон рН градиенти боюнча электр талаасын колдонуу аркылуу протеиндерди изоэлектрдик чекитине жараша бөлүүчү электрофоретикалык ыкма. Демек, бул хроматофокус менен изоэлектрдик фокустун ортосундагы негизги айырма.
Хроматофокус менен изоэлектрдик фокустоонун дагы бир айырмасы хроматофокустоо электр талаасын камтыбайт, ал эми изоэлектрдик фокустоо электр талаасын талап кылат.
Кыскача маалымат – Хроматофокус менен изоэлектрдик фокустоо
Хроматофокустоо жана изоэлектрдик фокустоо молекулалардын, өзгөчө абдан окшош молекулалардын чечүүчү жөндөмдүүлүгү жогору болгон эки окшош ыкма. Хроматофокус - бул жогорку чечилиштеги колонна хроматографиясынын ыкмасы, ал эми изоэлектрдик фокустоо электрофорез ыкмасы. Хроматофокустоо изоэлектрдик фокустоодон айырмаланып, электр талаасын камтыбайт. Ошентип, бул хроматофокус менен изоэлектрдик фокустоо ортосундагы айырманы жалпылайт.
