Өсүмдүктөр менен жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоонун негизги айырмасы, өсүмдүк ДНКсын экстракциялоодо, жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоодо клетканын мазмунун чыгаруу үчүн кургак музда же суюк азотто кыртышты майдалоо менен клетканын дубалын бузуу керек., жаныбарлардын клеткаларында клетка дубалы болбогондуктан, бул кадамды жасоонун кажети жок.
Геномдук ДНК – өсүмдүк жана жаныбар клеткаларынын генетикалык материалы. Геномдук ДНК ар бир өсүмдүк же жаныбар үчүн уникалдуу. Жакшы сапаттагы ДНКнын ДНК экстракциясы молекулярдык изилдөө үчүн зарыл шарт болуп саналат. Организмдердин ДНКсы идентификациялоо, ооруларды диагностикалоо, спецификалык гендерди жана ырааттуулуктарды аныктоо, соттук-медициналык максаттар, аталыкты аныктоо, геномду секвенирлөө, дарыларды иштеп чыгуу ж.б. ДНКны экстракциялоо ыкмасы клеткалардын түрүнө жараша өзгөрөт – ал жаныбар клеткасыбы же өсүмдүк клеткасыбы.
Өсүмдүктөрдүн ДНКсын экстракциялоо деген эмне?
Өсүмдүк клеткаларындагы ДНК ар кандай молекулярдык изилдөөлөр үчүн чыгарылат. Ал бүтүн, таза геномдук ДНКны бөлүп алуу үчүн талап кылынат. Демек, жаныбарлардын клеткаларынан ДНК алуу протоколдорунан айырмаланган ДНК алуу протоколдорунун ар кандай түрлөрү бар. Себеби өсүмдүк клеткаларында клетканын дубалы бар, ал клетканын мазмунун алып чыгуу үчүн талкаланышы керек.
Чыгып алуу адатта өсүмдүк ткандарын кургак музда же суюк азотто майдалоо жолу менен жасалат. Андан кийин клетка мембраналары бузулуп, клетканын мазмуну экстракциялоочу буферге чыгарылат. Бул адатта жуучу каражаттын жардамы менен жасалат; SDS (натрий додецил сульфаты) же CTAB (цетилтриметиламмоний бромид) буфери. Чыгарылган ДНК эндогендик нуклеазалардан EDTA сыяктуу хелаттоочу агент аркылуу корголот. Мындан тышкары, протеиндер хлороформ же фенолдун жардамы менен ДНКдан бөлүнөт.
01-сүрөт: Өсүмдүк ДНКсын экстракциялоо
Өсүмдүктөр полисахариддерди жана полифенолдорду, анын ичинде флавоноиддерди жана башка экинчилик метаболиттерди синтездейт. Бул кошулмалар таза геномдук ДНКнын алынышына тоскоол болот. Демек, өсүмдүктөрдүн ДНКсын экстракциялоо протоколдорунун көбү бул кошулмаларды жок кылуу үчүн цезий хлоридинин тыгыздыгынын градиенттик ыкмасы сыяктуу дагы бир кадамды камтыйт.
ДНКны экстракциялоо протоколдорунун көбү ДНКны экстракциялоо үчүн жалбырактын жаңы үлгүлөрүн колдонууну сунуштайт. Кээ бир ыкмалар суюк азот жана фенол сыяктуу коркунучтуу химиялык заттарды камтыбайт. CTAB (Cetyl trimethylammonium bromide) протоколу жогорку сапаттагы өсүмдүк геномдук ДНКсын казып алууга көмөктөшүүчү популярдуу өсүмдүк ДНК алуу протоколу болуп саналат. Бул өсүмдүк ДНКсын алуу үчүн жөнөкөй, коопсуз, ишенимдүү жана үнөмдүү ыкма. Башка ыкмалардын көбү CTAB ыкмасынын өзгөртүлгөн версиялары.
Жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоо деген эмне?
Жаныбардын ДНКсын экстракциялоо – бул молекулярдык анализ үчүн жаныбарлардын клеткаларынан геномдук ДНКны алуу. Өсүмдүк ДНКсын экстракциялоодон айырмаланып, клетка дубалынын бузулушу жаныбарлардын клеткалары үчүн зарыл эмес, анткени аларда клетка дубалы жок. Кан клеткалары - жаныбарлардын клеткаларынын эң кеңири таралган түрү, алар ар кандай максаттарда колдонулат.
02-сүрөт: ДНК экстракциясы
Фенол-хлороформ ыкмасы кан клеткалары үчүн эң жакшы тандоолордун бири. Бул ыкмадан ДНКны алууда ДНКнын түшүмү жана сапаты жогору болот. Бул суюктук-суюк ДНК экстракциялоо протоколу жана бул ыкма ДНК молекулаларын аралашпаган эритмелерде эригичтигинин негизинде ажыратат. Фенол, хлороформ жана изоамил спирти бул ыкманын негизги үч ингредиенти болуп саналат.
Өсүмдүктөрдүн жана жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоонун кандай окшоштуктары бар?
- Өсүмдүктөрдүн жана жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоодо клетка мембраналары бузулушу керек.
- ДНК эндогендик нуклеазалардан корголушу керек.
- Андан тышкары, ДНКнын кыркылышына жол бербөө керек.
- Өсүмдүк ДНКсын жана жаныбарлардын ДНКсын алуу үчүн коммерциялык комплекттер бар.
- Өсүмдүктөрдүн жана жаныбарлардын ДНКсын алуу ыкмаларынын көбү үзгүлтүксүз модификацияны жана стандартташтырууну талап кылат.
Өсүмдүктөр менен жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоонун ортосунда кандай айырма бар?
Өсүмдүк менен жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоонун негизги айырмасы, өсүмдүк ДНКсын экстракциялоо үчүн клетканын дубалын бузуу үчүн кургак музда же суюк азотто өсүмдүк кыртышын майдалоо талап кылынат, ал эми жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоо бул кадамды талап кылбайт, анткени алар жаныбарлардан. клеткалардын клетка дубалы жок. CTAB ыкмасы өсүмдүктөрдүн ДНКсын экстракциялоонун эң мыкты ыкмаларынын бири, ал эми фенол-хлороформ ыкмасы жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоонун эң мыкты ыкмаларынын бири.
Төмөндө инфографика таблицада өсүмдүктөр менен жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоонун ортосундагы айырмачылыктар келтирилген.
Кыскача маалымат – Өсүмдүктөргө каршы жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоо
Ар кандай клетка типтеринен ДНКны алуу үчүн ар кандай ыкмалар бар. Демек, өсүмдүктөрдүн ДНКсын алуу протоколдору жаныбарлардын ДНКсын алуу протоколдорунан айырмаланат. Өсүмдүк ДНКсын экстракциялоо клетка дубалынын, клетка мембранасынын жана ядролук мембрананын бузулушун талап кылат, ал эми жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоо клетка мембранасынын жана ядролук мембрананын бузулушун талап кылат. Андан да маанилүүсү, жаныбар клеткасынын ДНКсын экстракциялоо кургак музда же суюк азотто майдалоо менен клетканын дубалдарын бузууну талап кылбайт. Ошентип, бул өсүмдүк менен жаныбарлардын ДНКсын экстракциялоонун ортосундагы негизги айырма.
