FPLC менен HPLCтин негизги айырмачылыгы FPLC протеиндер, нуклеотиддер жана пептиддер сыяктуу чоң биомолекулаларды тазалаган суюк хроматографиянын бир түрү, ал эми HPLC майда молекулалык салмактагы кошулмаларды бөлүп турган суюк хроматографиянын бир түрү.
Суюк хроматография - бул үлгүнү анын айрым компоненттерине бөлүү үчүн колдонулган ыкма. Бул бөлүнүү конкреттүү үлгүлөрдүн кыймылдуу жана стационардык фазалар менен өз ара аракеттешүүсүнөн улам пайда болот. Үлгүдөгү компоненттер суюк хроматографияда кыймылдуу фазага ар бир компоненттин жакындыгына жараша бөлүнөт. Мобилдик фаза жана үлгү мамыча аркылуу өткөндө үлгүнүн компоненттери UV-VIS спектроскопиясы аркылуу аныкталуучу тилкелерге бөлүнө баштайт. Ошондуктан, FPLC жана HPLC суюк хроматографиянын эки түрү болуп саналат.
FPLC деген эмне?
FPLC - белоктор, нуклеотиддер жана пептиддер сыяктуу чоң биомолекулаларды тазалоочу суюк хроматографиянын бир түрү. Тез протеин суюк хроматографиясы (FPLC) биринчи жолу 1982-жылы Pharmacia компаниясы тарабынан Швецияда иштелип чыккан жана сатылган. Ал көбүнчө протеин аралашмаларын талдоо же тазалоо үчүн колдонулат. Бул кыймылдуу суюктукка (мобилдик фаза) жана тешиктүү катуу материалга (стационардык фаза) үлгү компоненттеринин жакындык принцибинин негизинде ишке ашат. FPLCде мобилдик фаза буфер, ал эми стационардык фаза мончоктордон турган чайыр. Ал адатта цилиндр түрүндөгү айнек же пластик мамычага салынган кайчылаш байланышкан агарозадан турат.
01-сүрөт: FLPC (тез протеин суюктук хроматографиясы) аппараты
FLPC стратегиясынын көпчүлүгүндө ион алмаштыруучу чайыр колдонулат. Демек, кызыктырган протеин чайыр менен заряддын өз ара аракеттенүүсү аркылуу байланышат. FLPC техникасы ошондой эле эки буферди колдонот: буфер 1 (иштеп жаткан буфер) жана буфер 2 (элюция буфери). Башында, буферди жана үлгү аралашмасын иштетүүдө колонка аркылуу өткөндө, аралашмага кызыккан белок заряддын өз ара аракеттенүүсү аркылуу чайыр менен байланышат. Бирок кызыккан протеин диссоциацияланып, процесстин аягында элюциялык буфер колонка аркылуу өткөндө элюциялык буфердеги эритмеге кайтып келет. Кийинчерээк эритме (элюанттын курамында кызыккан белок бар) туздун концентрациясын жана белоктун концентрациясын өлчөөчү эки детектордон өтөт. Ар бир белок элюцияланганда, аны аныктоо учурунда "чоку" болуп көрүнөт жана андан ары колдонуу үчүн чогултулушу мүмкүн.
HPLC деген эмне?
HPLC - майда молекулалык салмактагы кошулмаларды бөлүүчү суюк хроматографиянын бир түрү. 1969-жылы биринчи HPLC коммерциялык түрдө Уотерс корпорациясы, АКШ тарабынан өндүрүлгөн. Жогорку натыйжалуу суюк хроматографияда (HPLC) эриткичтеги (мобилдик фаза) үлгү аралашмасы (аналит) жогорку басымда хроматографиялык таңгактоочу материал (стационардык фаза) менен колонка аркылуу айдалат. Үлгү аралашмасы гелийдин же азоттун кыймылдаткыч газ агымы тарабынан ташылат.
02-сүрөт: HPLC (Жогорку натыйжалуу суюктук хроматографиясы)
Үлгү аралашмасындагы стационардык фаза менен эң аз өз ара аракеттешкен же мобилдик фаза менен эң көп өз ара аракеттенген компоненттер мамычадан батыраак чыгат. Башка жагынан алып караганда, үлгү аралашмасындагы стационардык фаза менен эң көп өз ара аракеттешүүсүнө ээ же мобилдик фаза менен эң аз өз ара аракеттешкен компоненттер колоннадан жайыраак чыгат. Жогорудагы өз ара аракеттенүү принцибинин негизинде үлгү аралашмасынын компоненттерин бөлүүгө болот. Мындан тышкары, аспаптын детектору колонкадан чыккан үлгү аралашмасынын ар бир компонентин аныктайт. HPLC экологиялык жана биологиялык үлгүлөрдү дарылар, токсиндер же пестициддер сыяктуу белгилүү кошулмалардын бар же жок экендигин текшерүү үчүн колдонулат. Ал фармацевтика, экология, криминалистика жана химия сыяктуу ар кандай тармактарда колдонулат.
FPLC жана HPLC ортосунда кандай окшоштуктар бар?
- FPLC жана HPLC суюк хроматографиянын түрлөрү.
- Экөө тең биологиялык үлгүлөрдү бөлүү жана идентификациялоо үчүн колдонулат.
- Алардын суюк кыймылдуу фазасы жана катуу стационардык фазасы бар.
- Экөө тең үлгүдөн өтүү үчүн тилкени колдонушат.
- Бул ыкмалар үлгүлөрдү бөлүү жана аныктоо үчүн насосторду, детекторлорду, клапандарды жана программаларды колдонот.
FPLC жана HPLC ортосунда кандай айырма бар?
FPLC - белоктор, нуклеотиддер жана пептиддер сыяктуу чоң биомолекулаларды тазалоо үчүн колдонулган суюк хроматографиянын бир түрү. HPLC майда молекулалык салмактагы кошулмаларды бөлүү үчүн колдонулган суюк хроматографиянын бир түрү. Ошентип, бул FPLC жана HPLC ортосундагы негизги айырма. Мындан тышкары, FPLC рН жана өткөргүчтүк мониторлорду, ошондой эле фракция жыйноочуларды колдонот. Ал эми HPLC рН жана өткөргүчтүк мониторлорду жана фракция жыйноочуларды колдонбойт.
Төмөнкү инфографикада FPLC менен HPLC ортосундагы көбүрөөк айырмачылыктар таблица түрүндө келтирилген.
Корытынды – FPLC жана HPLC
Хроматография аралашмадан компоненттерди бөлүү үчүн колдонулган лабораториялык аналитикалык ыкма. Ал колонна хроматографиясы, газ хроматографиясы, суюк хроматография, ион алмашуу хроматографиясы жана башкалар сыяктуу бир нече түргө бөлүнөт. FPLC жана HPLC суюк хроматографиянын эки түрү болуп саналат. FPLC суюк хроматографиянын бир түрү, ал белоктор, нуклеотиддер жана пептиддер сыяктуу чоң биомолекулаларды тазалоо үчүн колдонулат. Башка жагынан алганда, HPLC майда молекулалык салмактагы кошулмаларды бөлүү үчүн колдонулган суюк хроматографиянын бир түрү. Ошентип, бул FPLC менен HPLC ортосундагы айырманын корутундусу.
