Агароза менен полиакриламиддик гел электрофорезинин негизги айырмасы, агароз гель электрофорези ДНКнын салыштырмалуу чоңураак фрагменттерин бөлүү үчүн горизонталдуу куюлган агароз гелдерди колдонот, ал эми полиакриламиддик гел электрофорези кыскараак ядролук кислота фрагменттерин бөлүү үчүн вертикалдуу куюлган полиакриламиддик гелдерди колдонот.
Электрофорез – бул ДНК, РНК жана белоктор сыяктуу биомолекулаларды бөлүп алуу үчүн гел матрицасында колдонулган электр талаасын колдонгон техниканын бир түрү. ДНК, РНК жана белоктор сыяктуу биомолекулалардын электрофорез аркылуу бөлүнүшү зарядга жана чоңдукка негизделген. Үлгүлөр гелдин скважиналарына жүктөлөт. Кийинчерээк, электр талаасы гел боюнча колдонулат. Талаа терс заряддуу молекулалардын оң электродду көздөй жылышын шарттайт. Гель матрицасы молекулярдык электин ролун аткарат, ал аркылуу эң кичинекей молекулалар тез өтөт же чоңураак молекулалар жай кыймылдайт. Бул зарядга жана өлчөмүнө жараша молекулаларды бөлүүгө мүмкүндүк берет. Ошондуктан, агароза жана полиакриламиддик гел электрофорези молекулаларды өлчөмүнө жана зарядына жараша бөлүүгө жардам берген гел электрофорез ыкмаларынын эки түрү болуп саналат.
Агароза гели электрофорез деген эмне?
Агароза гели электрофорези ДНК жана РНК сыяктуу биомолекулаларды бөлүп алуу үчүн агароз гелдерин колдонгон ыкма. Бул нуклеиндик кислоталарды биринчи кезекте өлчөмү боюнча бөлүү үчүн колдонулган ыкма. Бул техникада колдонулган агароза деп аталган негизги кошулма полисахарид болуп саналат. Ал деңиз чөптөрүнөн келет. Агарозду кайнап жаткан буферде эритип, анан туурасынан сакталган лотокко куюса болот. Табада ал муздагандан кийин катуу болуп, плитаны түзөт. Агароздук гелдер тарак менен ордуна куюлуп, гел катып калгандан кийин ДНК же РНК сыяктуу нуклеиндик кислоталар жүктөлгөн кудуктар жасалат.
Сүрөт 01: Агароздук гел электрофорез
Гель кийинчерээк тиешелүү буферге чөмүлдүрүлүп, гелге ток колдонулат. ДНК молекуланын ырааттуу курамына көз каранды эмес бирдиктүү терс зарядга ээ. Демек, ДНК молекулалары катоддон (-) анодго (+) карай жылат. Миграция ылдамдыгы түздөн-түз молекуланын өлчөмүнө жараша болот. Эң чоң макромолекулалар гелди өтүүдө эң кыйын учурга туш болушат. Башка жагынан алганда, кичинекей макромолекулалар тез жана абдан жеңил гел аркылуу тайып.
Полиакриламиддик гель электрофорез деген эмне?
Полиакриламиддик гел электрофорези (PAGE) – биомолекулаларды бөлүп алуу үчүн полиакриламиддик гелдерди колдонгон ыкма. Бул биологиялык макромолекулаларды, көбүнчө белокторду жана нуклеиндик кислоталарды электрофоретикалык мобилдүүлүккө жараша бөлүү үчүн кеңири колдонулган ыкма. Акрилонитрилдин гидратациясынын натыйжасында нитрил гидратазасы аркылуу акриламид молекулалары пайда болот. Акриламид сууда эрийт жана эркин радикал демилгечилерди кошкондо акриламид полимерленет, натыйжада полиакриламиддик гел пайда болот. Адатта, акриламиддин концентрациясынын жогорулашы гелдеги тешикчелердин көлөмүн азайтат. Полиакриламиддик гелдер агароздук гелдерден айырмаланып, вертикалдуу куюлат.
02-сүрөт: Полиакриламиддик гелдик электрофорез
Полиакриламиддик гелдик электрофорезде молекулалар молекулалардын жогорку тартиптеги түзүлүшүн сактап, өз абалында иштей алат. Бул ыкма жергиликтүү PAGE деп аталат. Же болбосо, химиялык денатурант дагы жогорку даражадагы түзүлүштү алып салуу жана молекуланы кыймылдуулугу анын узундугуна гана көз каранды болгон структураланбаган молекулага айландыруу үчүн кошулса болот. Бул түрү SDS-PAGE деп аталат.
Агароза жана полиакриламиддик гель электрофорездин кандай окшоштуктары бар?
- Агароза жана полиакриламиддик гель электрофорези гель электрофорезинин эки түрү болуп саналат.
- Чындыгында алар молекулярдык биологиялык ыкмалар.
- Экөө тең ДНК жана белоктор сыяктуу биологиялык макромолекулаларды аныктоо үчүн колдонулат.
- Бул ыкмалар тажрыйбалуу техниктер же изилдөөчүлөр тарабынан жасалат.
- Эки техникада тең макромолекулалардын бөлүнүшү зарядга жана чоңдукка негизделет.
- Эки ыкма тең ДНК жана РНК сыяктуу нуклеиндик кислоталарды бөлүүгө мүмкүндүк берет.
Агароза жана полиакриламиддик гель электрофорездин ортосунда кандай айырма бар?
Агароза гели электрофорези - бул биомолекулаларды бөлүп алуу үчүн горизонталдуу куюлган агароз гелдерин колдонгон ыкма, ал эми полиакриламиддик гел электрофорези - биомолекулаларды бөлүп алуу үчүн вертикалдуу куюлган полиакриламиддик гелдерди колдонгон ыкма. Бул агароз жана полиакриламиддик гел электрофорездин ортосундагы негизги айырма. Андан тышкары, агароз гел электрофорези ДНК менен РНКны бөлүү үчүн колдонулат, ал эми полиакриламиддик гель электрофорези ДНК, РНК же белоктор сыяктуу нуклеиндик кислоталарды бөлүү үчүн колдонулат.
Төмөнкү таблица агароза менен полиакриламиддик гел электрофорезинин ортосундагы айырманы жалпылайт.
Кыскача маалымат – Агароза vs Полиакриламиддик гель электрофорез
Агароза жана полиакриламиддик гель электрофорези молекулярдык биология лабораторияларында колдонулган гель электрофорез ыкмаларынын эки түрү. Агароз гел электрофорези биомолекулаларды бөлүп алуу үчүн агароз гелин колдонот. Агароза жалпысынан адамдар үчүн уулуу эмес, ал эми полиакриламид адамдар үчүн уулуу. Мындан тышкары, агароз гели электрофорези азыраак чечимди көрсөтөт, ал эми полиакриламиддик гел электрофорези көбүрөөк чечимди көрсөтөт. Полиакриламиддик гель электрофорези биомолекулаларды бөлүп алуу үчүн полиакриламиддик гелди колдонот. Бул агароза менен полиакриламиддик гел электрофорезинин ортосундагы айырманы жалпылайт
