Негизги айырмасы – Клондоо жана Субклондоо
Клондоо жана субклондоо - бул кызыктырган ДНКны же генди алып жүргөн генетикалык жактан окшош клеткаларды же организмдерди түзүүчү молекулярдык биологиялык процедуралар. Клондоо - бул кызыкдар генди же ДНКны векторго киргизүүнү, аны кабыл алуучу бактериянын ичинде репликациялоону жана генетикалык түзүлүштүн так көчүрмөсү болгон клеткаларды же организмдерди өндүрүүнү камтыган ыкма. Субклондоштуруу - бул векторго мурунтан эле киргизилген кызыкдар генди экинчилик векторго киргизүүнү, аны кабыл алуучу бактериянын ичинде репликациялоону жана клеткалардын же организмдердин генетикалык жактан окшош көчүрмөлөрүн өндүрүүнү камтыган ыкма. Клондоштуруу менен субклондоштуруунун негизги айырмасы, клондоштурууда кызыккан ген векторго байлангандан кийин, клондоо процессин улантат, ал эми субклондоштурууда буга чейин эле клондолгон кызыккан ген ата-энелик вектордон бөлүнүп, кайра киргизилет. алуучунун вектору жана процессти улантыңыз.
Клондоо деген эмне?
Клондоо – бул генетикалык жактан окшош организмдерди же клеткаларды чыгаруучу процедура. Табиятта клондоштуруу жыныссыз көбөйүү жолу менен болот. Эч кандай генетикалык рекомбинация же өзгөртүү болбогондо, кыз клеткалары ата-энесинин генетикалык курамын алышат. Прокариоттук жана эукариоттук организмдер экилик бөлүнүү, бүчүрлөө, митоз ж.б. жолу менен клондорду түзүшөт. Молекулярдык биологияда гендерди же ДНКнын белгилүү фрагменттерин клондоо бул ДНКнын ошол конкреттүү бөлүгүнүн түзүмүн жана функциясын изилдөөнүн популярдуу ыкмасы болуп саналат.
Молекулярдык клондоштуруунун негизги максаты – генетикалык жактан окшош клеткалардын же кызыккан ДНК фрагментин (негизинен гендер) алып жүргөн организмдердин миллиондогон көчүрмөлөрүн жасоо. Ал башкасынын так генетикалык көчүрмөлөрү менен организмдерди жаратат. Негизинен, структуралык жана функционалдык маалыматты алуу жана ДНК секвенциясы үчүн молекулярдык изилдөөлөрдө конкреттүү гендер клондолот. Ошондой эле, белгилүү бир протеиндерди же продуктуларды чоң масштабда өндүрүү үчүн клондоштуруу кеңири колдонулат.
Клондоо процедурасы
Клондоо процедурасынын негизги кадамдары төмөнкүдөй.
- Кызыккан генди идентификациялоо жана изоляциялоо. (ПЦР аркылуу кызыктырган гендин күчөтүлүшү).
- Кызыккан генди сиңирүүнү чектөө (Рестрикция эндонуклеаза генди кесип).
- Вектордук ДНКны сиңирүүнү чектөө. (Вектор ДНК да ошол эле чектөө эндонуклеазасы менен кесилген).
- Генди векторго киргизүү жана рекомбинантты молекуланын түзүлүшү.
- Рекомбинантты вектордун кабыл алуучу бактерияга трансформациясы.
- Трансформацияланган бактерияларды изоляциялоо жана идентификациялоо (плазмиддик вектор тандалуучу генди камтышы керек, көбүнчө трансформацияланган бактерияларды скрининг үчүн антибиотикке туруктуулук гени).
- Хосттун ичиндеги рекомбинантты ген экспрессиясы.
01-сүрөт: Клондоо процедурасы
Субклондоо деген эмне?
Субклондоштуруу – бул гендин керектүү функционалдуулугуна ээ болуу үчүн гендин экспрессиясын көрүү үчүн кызыккан генди бир вектордон экинчи векторго жылдыруу процедурасы. Бул ыкмада эки вектор тартылган; атап айтканда, негизги вектор жана көздөгөн вектор. Клондолгон кыстармалар субклондоштурууда кайра экинчи векторго жылдырылат. Генди биринчи вектордон экинчи векторго өткөрүүнүн максаты - биринчи вектор жасай албаган нерсени алуу же ДНКнын буга чейин клондолуп калган фрагментинин ичинде генди кайра бөлүп, аны жалгыз экспрессиялоо. Бул процедурада башында чектөө ферменттери колдонулат.
Субклондоо процедурасы
Субклондоштуруунун негизги кадамдары төмөнкүдөй.
- Регистрациялык эндонуклеазалардын жардамы менен донордук плазмидада (ата-энелик вектор) кызыккан ДНКнын бөлүнүшү.
- Кызыккан ДНКны ПТР аркылуу күчөтүү.
- ПЦР продуктуну (кызыктуу ДНК) гел электрофорези менен тазалоо.
- Алуучу плазмидинин негизги плазмидадагы кызыктырган ДНКны бөлүү үчүн колдонулган ошол эле чектөө эндонуклеазалары менен ачылышы.
- Кызыккан ДНКны (генди) реципиенттин плазмидасына бириктирүү, субклондолгон плазмидди түзүү.
- Субклондолгон вектордун компетенттүү кожоюн бактерияга трансформациясы.
- Трансформацияланган клеткаларды текшерүү.
- Плазмиддик ДНКны тазалоо жана керектүү продуктуларды алуу үчүн ДНК секвенциясы же гендердин экспрессиясы үчүн колдонуу.
Субклондоштуруу гендердин клондолгон тобунан бир генди бөлүп алган учурларда же кызыккан гендин так функциясын көрүү үчүн пайдалуу плазмидага өтүү талап кылынганда жүргүзүлөт.
02-сүрөт: Субклондоо процедурасы
Клондоо менен субклондоонун ортосунда кандай айырма бар?
Клондоо vs Субклондоо |
|
| Клондоо – бул генетикалык жактан окшош организмдерди же клеткаларды чыгаруучу процедура. | Субклондоштуруу – бул гендин керектүү функционалдуулугуна ээ болуу үчүн гендин экспрессиясын көрүү үчүн кызыккан генди бир вектордон экинчи векторго жылдыруу процедурасы. |
| Процесс | |
| Кызыккан ДНКны организмден бөлүп, векторго бир жолу киргизип, клондоңуз | Буга чейин клондолгон ДНК биринчи вектордон бөлүнүп, экинчи векторго салынып, клондолгон. |
| Векторлор аркылуу кыймылды киргизүү | |
| Кыстармаларды (кызыктуу ДНК) бир вектордон экинчи векторго жылдырбайт. | Кыстармаларды негизги вектордон көздөгөн векторго жылдыруу. |
Кыскача – Клондоо жана Субклондоо
Клондоо кызыктырган ген же ДНК киргизилген генетикалык жактан окшош клеткаларды же организмдерди жаратат. Ал кызыктырган ДНКны векторго жана кабыл алуучу бактериянын ичиндеги экспрессияга бөлүү жана киргизүү аркылуу ишке ашат. Субклондоо клондоштуруу менен окшош кадамдарды бөлүшөт. Бирок, субклондоштурууда буга чейин клондолуп калган ДНК фрагменти (кызыктуу ген) векторго киргизилип, кабыл алуучу бактерияга айланат. Бул клондоо жана субклондоо ортосундагы негизги айырма.
