Негизги айырмасы – Гель электрофорез vs SDS бети
Гель электрофорези – бул электр талаасында макромолекулаларды бөлүүчү ыкма. Бул ДНКны, РНКны жана белокторду аралашмалардан молекулалык өлчөмдөрүнө жараша бөлүү молекулярдык биологияда кеңири таралган ыкма. SDS Page - бул протеиндердин өлчөмүнө жараша протеин аралашмасынан бөлүү үчүн колдонулган гель электрофорезинин бир түрү. Гель электрофорези - бул ДНК, РНК жана белок бөлүү үчүн колдонулган нормалдуу техникага шилтеме жасоо үчүн колдонулган термин, ал эми SDS Page гел электрофорезинин бир түрү. Бул гел электрофорез жана SDS Page ортосундагы негизги айырма.
Гель электрофорез деген эмне?
Гель электрофорези лабораторияларда ДНК, РНК, белоктор ж.б. сыяктуу заряддуу молекулаларды алардын аралашмаларынан бөлүү үчүн колдонулган кеңири таралган ыкма. Гель электрофорезде гель колдонулат. Ал молекулярдык электирдин ролун аткарат. Гель электрофорезинде колдонулган гелдердин эки түрү бар, атап айтканда агароза жана полиакриламид. Гельди жана гелди даярдоону тандоо гел электрофорездеринде эске алынуучу маанилүү факторлор болуп саналат, анткени гелдин электрофорези аркылуу молекулалардын жакшы бөлүнүшү үчүн гелдин тешикчелеринин өлчөмүн кылдаттык менен башкаруу керек. Гель электрофорезинде гелдин эки учуна туташтырылган электр талаасы бар. Гельдин бир учу оң, экинчи учу терс заряддуу.
ДНК жана РНК терс заряддуу молекулалар. Алар гелдин терс учунан гелге жүктөлүп, электр талаасына колдонулгандан кийин, гелдин тешикчелери аркылуу гелдин оң заряддуу учуна жылат. Миграциянын ылдамдыгы молекуланын зарядына жана өлчөмүнө жараша болот. Кичинекей молекулалар чоңураак молекулаларга караганда гел тешикчелери аркылуу оңой миграцияланат. Демек, кичинекей молекулалар гел аркылуу узак аралыкты, ал эми чоңураак молекулалар кыска аралыкты басып өтүшөт. Гельдеги молекулалардын кыймылын байкоо үчүн боёктордун атайын түрлөрү колдонулат. Электр талаасы белгилүү бир убакыт аралыгында колдонулат жана молекулалардын жоголушуна жол бербөө жана молекулаларды басып өткөн жерлеринде кармап туруу үчүн токтойт. Гельде ар кандай тилкелерди байкоого болот. Бул тилкелер ар кандай өлчөмдөгү молекулаларды билдирет. Демек, гел электрофорези молекулаларды өлчөмүнө жараша айырмалоо үчүн пайдалуу.
Гел электрофорези ПЦР, RFLP, клондоштуруу, ДНК секвенирлөө, түштүк блоттинг, геномдун картасы ж.б.у.с. сыяктуу молекулярдык биологияда даярдоочу ыкма катары ар кандай ыкмаларга киргизилген.
01-сүрөт: Агароздук гел электрофорези
SDS Page деген эмне?
Натрий додецилсульфаты полиакриламиддик гел электрофорези (SDS Page) - белокторду бөлүү үчүн колдонулган гел электрофорезинин бир түрү. Белокторду бөлүп алуу үчүн гель электрофорези колдонулганда, белоктор ДНК жана РНК сыяктуу терс заряддуу эмес жана оң же терс учуна көчпөй тургандыктан, атайын дарылоо керек. Демек, белоктор денатурат жана гел электрофорез чейин терс заряд менен капталган. Бул натрий додецил сульфаты (SDS) деп аталган жуучу каражаттын жардамы менен жасалат. Колдоочу чөйрө үчүн SDS жана полиакриламиддик гелди колдонгон гел электрофорези SDS Page деп аталат. Бул ыкма көбүнчө биохимия, генетика, криминалистика жана молекулярдык биологияда колдонулат.
SDS Page учурунда белоктор SDS менен аралаштырылат. SDS белокторду сызыктуу формада ачат жана алардын молекулярдык массасына пропорционалдуу терс заряд менен каптайт. Терс заряддан улам белок молекулалары гелдин оң заряддуу учуна көчүп, молекулалык массаларына жараша бөлүнүшөт. SDS Page, полиакриламид гел үчүн катуу колдоо катары колдонулат. Белоктордун иш жүзүндө бөлүнүшү негизинен гелдин касиеттерине жараша болот. Демек, полиакриламид гелин даярдоо кылдаттык менен жүргүзүлүшү керек жана полиакриламиддин туура концентрациясын колдонуу керек. Полиакриламиддик гелдер агароздук гелдерге караганда жогорку резолюцияны көрсөтөт. Демек, SDS Page белок бөлүү үчүн жогорку резолюциялуу техника болуп эсептелет.
SDS Page - денатурациялоочу гел электрофорезинин бир түрү. Бул белок талдоо негизги чектөө бар. SDS белокторду бөлүү алдында денатурат кылгандыктан, ферменттик активдүүлүктү, протеин менен байланыштыруучу өз ара аракеттенүүнү, белок кофакторлорун ж.б. аныктоого мүмкүндүк бербейт.
02-сүрөт: SDS барагы
Гель электрофорез менен SDS Page ортосунда кандай айырма бар?
Гель Электрофорез vs SDS Page |
|
| Гель электрофорези – электр талаасынын жардамы менен макромолекулаларды бөлүү үчүн жасалган ыкма. | SDS Page - протеиндерди массасына жараша бөлүү үчүн колдонулган жогорку резолюциядагы гель электрофорез ыкмасы. |
| Gel Run | |
| Бул туурасынан же вертикалдуу түрдө аткарылышы мүмкүн. | SDS барагы ар дайым вертикалдуу иштейт. |
| Ажырашуунун негизи | |
| Бөлүү зарядга жана өлчөмүнө жараша болот. | Белоктун бөлүнүшү массасына жана зарядына жараша болот. |
| Чечим | |
| Агароза гелинин электрофорези аз, ал эми полиакриламиддик гел электрофорези жогорураак чечмелүүлүккө ээ | SDS барагынын чечилиши жакшыраак. |
| Денатурация | |
| Гель электрофорези денатурациялоочу жана денатурациялоочу эмес ыкмаларды камтыйт. | SDS Page белокторду бөлүүгө чейин денатурат кылат. |
Кыскача – Гель электрофорез vs SDS бет
Гель электрофорези ДНКны, РНКны жана белокторду алардын өлчөмүнө жана зарядына жараша бөлүү жана талдоо үчүн колдонулган кеңири таралган ыкма. Гель электрофорезинин эки негизги түрү бар, атап айтканда агароз гел электрофорези жана полиакриламиддик гел электрофорези. Агароздук гелдер негизинен нуклеин кислотасын бөлүү үчүн колдонулат; жогорку чечим талап кылынганда, полиакриламиддик гелдер колдонулат. SDS Page - протеиндердин татаал аралашмаларын бөлүү үчүн көбүнчө гель электрофорезинин бир түрү. Бул жогорку чечим белок бөлүү ыкмасы катары каралат. Бул гел электрофорези менен SDS Page ортосундагы айырма.
