GFP менен EGFP ортосундагы негизги айырма GFP сүт эмүүчүлөрдүн клеткаларында колдонулушу мүмкүн GFP жакшыртылган же инженердик түрү болуп саналат, ал эми сүт эмүүчү эмес клеткалардын молекулярдык клондоштуруу киргизилген жапайы түрдөгү белок болуп саналат..
Молекулярдык клондоштуруу - илимпоздор рекомбинанттык технология аркылуу белокторду экспрессиялоодо эбегейсиз колдонгон алдыңкы ыкма. Рекомбинантты ДНК технологиясында рекомбинантты векторду кабыл алуучу организмге ийгиликтүү трансформациялоо зарыл. Демек, трансформация процессинде, ген кызыктырган гендин кожоюнга трансформацияланган же өзгөрбөгөнүн аныктоо жана ырастоо керек. Муну баалоо үчүн молекулярдык биологдор бир нече ыкмаларды колдонушат. Ошол ыкмалардын ичинен бирөө кабарчы ген. Бул кабарчы гендер туура трансформаторлорду тандоо үчүн тандалма маркерлер катары иштешет. Ошентип, Green Fluorescent Protein (GFP) жана Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) молекулалык клондоштурууда колдонулган эки кабарчы белоктор болуп саналат.
GFP деген эмне?
GFP - бул 238 аминокислота калдыктарын жана аны башка флуоресценттик белоктордон айырмалап турган аминокислота тизмегинин бир нече тандалган аймактарын камтыган жапайы типтеги белок. Мындан тышкары, бул жапайы типтеги белок Aequorea Victoria обочолонуп башында болгон; медузанын бир түрү. Бирок табият кубулуштарында медузалар белгилүү бир стимулдарга жооп катары жашыл түстөгү флуоресценцияны чыгара алган.
Мурда бул концепция илимпоздорду таң калтырган жана алар аны рекомбинанттык ДНК технологияларында колдонууну чечишкен. Демек, илимпоздор жапайы гендин бул мутант формасын ген экспрессиясын изилдөөдө кабарчы ген катары колдонушкан. GFP жапайы гени бөлмө температурасында же UV нуру астында флуоресценция берген белокту өндүрүүгө жөндөмдүү. Ошондуктан, трансформанттарга киргизилгенде флуоресценцияны туюндурат жана чыгарат. Эгерде флуоресценция трансформация процессинен кийин пайда болсо, бул трансформация процессинин ийгилигин тастыктайт. Жөнөкөй сөз менен айтканда, флуоресценттик эмиссия кызыкдар генди алып жүрүүчү вектордун ийгиликтүү трансформациясын билдирет.
01-сүрөт: GFP
Ушул себептен улам, GFP ген экспрессиясынын in vivo маркери катары иштейт. Азыркы учурда, гендик инженерия ыкмалары GFP өндүрүү үчүн колдонулат. Ошондой эле, EGFP сыяктуу GFPдин көптөгөн өркүндөтүлгөн версиялары бар. Демек, бул молекулярдык клондоштурууда жана ген экспрессиясын изилдөөдө GFPди эффективдүү колдонууга мүмкүндүк берет.
EGFP деген эмне?
Enhanced Green Fluorescent Protein же EGFP GFPдин жакшыртылган версиясы. Жөнөкөй сөз менен айтканда, биз EGFPди жапайы типтеги GFPдин инженердик версиясы катары аныктай алабыз. GFP жапайы гени мутацияланганда, ал пайдалуу эффекттерди жаратат. Демек, GFP мутацияланган гени жаңы белгилерди туюндуруп алууга мүмкүндүк берет жана мунун натыйжасында биз жакшыртылган мүнөздөмөлөрү менен Жакшыртылган GFPди чыгара алабыз. Мындан тышкары, нурлануу же химиялык ыкмаларды колдонуу менен жапайы типтеги GFP генине мутацияларды ийгиликтүү киргизе алабыз. Бул мутацияланган гендер андан кийин пайдалуураак өзгөчөлүктөргө ээ болгон EGFPди чыгарышат.
02-сүрөт: EGFP
EGFP жакшыртылган мүнөздөмөлөрү төмөнкүлөр болуп саналат;
- Күчтүү флуоресценттик сигналдарды чыгара алат.
- Жогорку сезгичтикке ээ.
- Аны прокариоттордун жана башка төмөнкү деңгээлдеги эукариоттордун ордуна сүт эмүүчүлөрдүн клеткаларында колдоно алат.
- Ошондой эле продуктунун тазалыгын жогорулатат.
Ошондуктан, GFPге салыштырмалуу, EGFP ген экспрессиясын изилдөө үчүн артыкчылыктуу тандоо болуп саналат. Бирок GFPге салыштырмалуу продукт кымбатыраак.
GFP жана EGFP ортосунда кандай окшоштуктар бар?
- GFP жана EGFP жашыл түстү чыгарууга жөндөмдүү эки протеин болуп саналат
- Ошондуктан экөө тең ген экспрессиясын изилдөөдө кабарчы белоктордун милдетин аткарышат.
- Ошондой эле, рекомбинантты ДНК технологиясын колдонуу менен экөөнү тең синтездесе болот.
- Мындан тышкары, жакшыртылган формаларды синтездөө үчүн бул эки түрдү андан ары мутациялоо оңой.
GFP менен EGFP ортосунда кандай айырма бар?
Репортер ген - бул рекомбинантты ДНК технологиясына кызыккан ген менен байланышкан ген. Ал рекомбинантты вектордун хостко ийгиликтүү трансформацияланганын билдирет. Бул жерде, GFP жана EGFP кабарчы белоктор катары иштеген жашыл florescent белоктордун эки түрү болуп саналат. Бирок, GFP жана EGFP ортосундагы негизги айырма GFP жапайы түрү, ал эми EGFP GFP инженердик версия болуп саналат. Андан тышкары, EGFP GFPге караганда көбүрөөк пайдалуу мүнөздөмөлөргө ээ. Мисалы, EGFP күчтүү флуоресценттүү жарыкты чыгарат жана GFPге караганда сезгич. GFP менен EGFPдин дагы бир айырмасы - бул биз колдоно турган системалар. Сүт эмүүчү эмес системалар GFPди, ал эми сүт эмүүчүлөр системалары EGFPди колдонушат.
Төмөнкү инфографика GFP менен EGFP ортосундагы айырманы таблица түрүндө көрсөтөт.
Корытынды – GFP жана EGFP
GFP жана EGFP молекулярдык клондоштуруу жана ген экспрессия изилдөөлөрүндө кабарчы белоктор болуп саналат. GFP жашыл флуоресценттүү протеин болгон жапайы типтеги белок. Белок алгач Aequorea victoria медузасынан обочолонгон. Ал эми, EFGP GFP белоктун күчөтүлгөн түрү болуп саналат. Бул жакшыртылган мүнөздөмөлөрү менен жапайы типтеги мутант. Демек, EFGP жогорку сигнал күчү жана жогорку сезгичтиги бар. Ошондуктан, биз аны сүт эмүүчүлөрдүн векторлорунда колдоно алабыз. Ал эми, GFP колдонуу негизинен сүт эмүүчүлөрдүн эмес векторлордо гана колдонулат. Жалпысынан алганда, бул GFP менен EGFP ортосундагы айырма.
