Ачыткы бир гибрид менен ачыткы эки гибриддин ортосундагы негизги айырма ачыткы бир гибрид ДНК-белоктун өз ара аракеттенүүсүн талдоо үчүн in vitro негизиндеги анализ, ал эми ачыткы эки гибрид белок-белок өз ара аракеттенүүсүн талдоо үчүн in vitro негизиндеги анализ.
Клеткалык молекулалардын өз ара аракеттенүүсүн изилдөө ген экспрессиясына жана белок жолдоруна катышкан таануу жерлерин аныктоого жардам берет. ДНК менен протеиндин өз ара аракеттенүүсү ДНКнын модификациялары жана транскрипциялык жөнгө салуу ж.б. сыяктуу клеткалык процесстердин ажырагыс бөлүгү болуп саналат. Башка жагынан алганда, белок менен белоктун өз ара аракеттенүүсү репликация, транскрипция, которуу жана сигналды өткөрүү сыяктуу клеткалык процесстерде маанилүү ролду ойнойт. Ошондуктан, ар кандай анализдер аркылуу клетка молекулаларынын бул өз ара аныктоо үчүн абдан маанилүү болуп саналат. Ачыткы бир гибрид жана ачыткы эки гибрид ДНК-белок жана белок-белок өз ара аракеттенүүсүн талдоо үчүн in vitro негизиндеги эки анализ.
Dast One гибрид деген эмне?
Ачыткы бир гибрид (Y1H) клетка ичиндеги ДНК-белоктун өз ара аракеттенүүсүн талдоо үчүн in vitro негизиндеги анализ. Бул ыкма биринчи жолу 1993-жылы Ван жана Рид тарабынан негизделген. Ошондон бери ал биологиялык изилдөөлөрдөгү чоң күчтү көрсөттү. Бул анализде эки негизги компонент бар: ДНК жеми жана белок олжосу.
01-сүрөт: Бир гибрид ачыткы
Процедурада ДНК ырааттуулугу (ДНК жеми) адегенде эки башка кабарчынын (HIS3, LacZ) агымында клондолот. Бул кабарчылардын конструкциялары ачыткы штаммынын геномуна бириктирилген. Транскрипциялык факторлор белоктун жеми катары кабыл алынат. Транскрипциялык факторлор гибриддик белокторду түзүү үчүн ачыткы Gal4 транскрипциялык факторунун транскрипциялык активдештирүү доменине (AD) кошулат. Бул гибриддик белок ачыткы штаммына киргизүүдөн мурун плазмидге бириктирилет. Рекомбинантты плазмидди киргизгенден кийин, транскрипциялык фактор ДНК фрагменти менен өз ара аракеттенгенде, AD бөлүгү кабарчы ген экспрессиясын (HIS3 же LacZ) активдештирет. Плазмидаларды секвенирлөө ДНК фрагменти менен байланыша ала турган транскрипциялык факторду аныктоого мүмкүндүк берет. Жакында, ачыткы бир гибрид ыкмасы оорунун диагностикасын изилдөө үчүн колдонулган. Ошондуктан, келечекте бул анализ илимий изилдөөдө жана медициналык дарылоодо кеңири колдонулат.
Ачыткы эки гибрид деген эмне?
Ачыткы эки гибрид (Y2H) клетка ичиндеги протеин менен белоктун өз ара аракеттенүүсүн талдоо үчүн in vitro негизиндеги анализ. Бул ыкма алгач 1989-жылы Стэнли Филдс жана Ок-Кю Сонг тарабынан табылган. Бул ыкма ачыткынын Gal4 транскрипция факторун колдонуу менен белок менен протеиндин өз ара аракеттенүүсүн аныктайт.
02-сүрөт: ачыткы эки гибрид
Бул ыкмада адегенде кызыктырган протеиндердин жардамы менен эки синтез (гибриддер) түзүлөт: бир протеинди ДНКны байланыштыруучу домен (DBD) менен бириктирүү жана башка протеинди Gal4 транскрипция факторунун активатор домени (AD) менен бириктирүү аркылуу. DBD менен кошулган протеин жем деп аталат, ал эми AD менен кошулган белок олжо катары белгилүү. Ачыткы штаммында жем менен олжонун өз ара аракеттенүүсүнүн натыйжасында DBD жана AD репортер генинин жогору жагында функционалдык Gal4 транскрипция факторун түзүү үчүн жакын жерге келтирилет. Функционалдык транскрипция фактору кабарчы ген экспрессиясын активдештирет. Мындан тышкары, бул ыкма учурда сүт эмүүчүлөрдүн клеткаларындагы интегралдык мембрана белокторунун өз ара аракеттенүүсүн текшерүү үчүн колдонулат.
Ачыткы бир гибрид менен ачыткы эки гибриддин кандай окшоштуктары бар?
- Ачыткы бир гибрид жана ачыткы эки гибрид ДНК-белок жана белок-белок өз ара аракеттенүүсүн талдоо үчүн in vitro негизинде эки анализ.
- Бул анализдерде ачыткы штаммдары колдонулат.
- Эки анализде Gal4 транскрипция факторунун активдештирүү домени (AD) колдонулат.
- Алар өз ара аракеттенишүүнү аныктоо үчүн кабарчы генин (HIS3 же LacZ) колдонушат.
- Алардын жеми жана жеми бар.
- Эки анализ тең заманбап биологиялык изилдөөдө абдан пайдалуу.
Ачыткы бир гибрид менен ачыткы эки гибридинин ортосунда кандай айырма бар?
Ачыткы бир гибриди ДНК менен протеиндин өз ара аракеттенүүсүн талдоо үчүн in vitro негизиндеги анализ, ал эми ачыткы эки гибрид белок менен протеиндин өз ара аракеттенүүсүн талдоо үчүн in vitro негизиндеги анализ. Ошентип, бул ачыткы бир гибрид жана ачыткы эки гибрид ортосундагы негизги айырма. Мындан тышкары, ачыткы бир гибридде, жем ДНК фрагменти, ал эми олжо - белок молекуласы. Башка жагынан алганда, ачыткы эки гибридде, жем да, олжо да белок молекулалары.
Төмөнкү инфографикада ачыткы бир гибрид менен ачыткы эки гибриддин ортосундагы айырмачылыктар жанаша салыштыруу үчүн таблица түрүндө келтирилген.
Кыскача маалымат – ачыткы бир гибрид vs ачыткы эки гибрид
Ачыткы бир гибрид жана ачыткы эки гибрид эки маанилүү in vitro негизиндеги анализдер. Ачыткы бир гибрид - бул ДНК менен протеиндердин өз ара аракеттенүүсүн талдоо үчүн in vitro негизиндеги анализ, ал эми ачыткы эки гибрид - белок менен протеиндин өз ара аракеттенүүсүн талдоо үчүн in vitro негизиндеги анализ. Ошентип, бул ачыткы бир гибрид менен ачыткы эки гибриддин ортосундагы негизги айырма.
