Негизги айырмасы – SDS Page vs Western Blot
Western blotting - протеин үлгүсүндөгү белгилүү бир протеинди аныктоочу ыкма. Бул ыкма бир нече негизги кадамдар аркылуу жүзөгө ашырылат: гел электрофорез, тазалоо жана гибриддештирүү. Натрий додецил сульфаты полиакриламиддик гел электрофорези (SDS Page) протеиндерди өлчөмдөрүнө (молекулярдык салмактарына) жараша бөлүү үчүн колдонулган гель электрофорез ыкмасынын бир түрү. Western blot - бул SDS бетиндеги протеиндердин бирдей үлгүсүн өткөрүп берүү үчүн колдонулган тазалоочу мембрананын атайын барагы. SDS Page менен western blot ортосундагы негизги айырма SDS Page аралашмадагы белокторду бөлүүгө мүмкүндүк берет, ал эми western blot аралашмадан белгилүү бир протеинди аныктоого жана сандык аныктоого мүмкүндүк берет. Экөө тең протеин талдоо изилдөөлөрүндө пайдалуу.
SDS Page деген эмне?
SDS Page белок бөлүү үчүн колдонулган гел электрофорез ыкмасы болуп саналат. Ал көбүнчө биохимия, генетика, криминалистика жана молекулярдык биологияда колдонулат. Белоктор үлгүдөн алынгандан кийин, алар SDS жана полиакриламидден турган гелде иштетилет. SDS - бул протеиндерди сызыктуу кылуу (белокторду денатуралаштыруу) жана алардын молекулярдык массасына пропорционалдуу сызыктуу белокторго терс заряд берүү үчүн колдонулган аниондук жуугуч. Полиакриламид гелдин бекем таянычына айланат. Терс заряддуу денатурацияланган белоктор гел аркылуу аппараттын оң учуна жылат. Белоктордун чоңдугуна жараша миграция ылдамдыгы белоктордун ортосунда ар кандай болот жана бөлүнүү пайда болот. Ошондуктан, SDS барагы жеке белокторду алардын өлчөмүнө жараша бөлүү үчүн пайдалуу.
Белокторду фракциялоо үчүн полиакриламиддик гелди даярдоо SDS Page теги чечүүчү кадам болуп саналат. Полиакриламиддин туура концентрациясы жана колдонулган кайчылаш агенттин түрү гелдин физикалык касиеттерине катуу таасир этет, бул ар кандай протеиндердин иш жүзүндө бөлүнүшүнө алып келет. Гельдин тешикчелеринин өлчөмдөрүн натыйжалуу бөлүү үчүн туура башкаруу керек. Бирок, SDS Page жогорку чечилиштеги белок бөлүү ыкмасы катары каралат.
SDS Page техникасында белок анализинде негизги чектөөлөр бар. SDS белокторду бөлүү алдында денатурат кылгандыктан, ферменттик активдүүлүктү, протеин менен байланыштыруучу өз ара аракеттенүүнү, белок кофакторлорун ж.б. аныктоого мүмкүндүк бербейт.
01-сүрөт: SDS барагы
Western Blot деген эмне?
Western blotting ыкмасы белоктун аралашмасынан белгилүү бир протеинди аныктоого жана протеиндин санын жана молекулярдык салмагын өлчөөгө мүмкүндүк берет. Western blot - бул SDS-полиакриламиддик гелдеги протеин үлгүлөрүнүн күзгү сүрөтүн алуу үчүн тазалоо процедурасында колдонулган мембрана. Вестерн тазалоо үчүн колдонулган мембрана көбүнчө нитроцеллюлозадан же поливинилидендифторидден (PVDF) турат. Берилген протеин менен мембрана каалаган протеинди аныктоо үчүн колдонулушу мүмкүн. Гибриддештирүү аркылуу керектүү протеинди аныктоо үчүн жогорку сапаттагы антитело талап кылынат. Антитело өзүнүн спецификалык антигени менен байланышып, керектүү антигендин бар экенин көрсөтөт, бул протеин.
Белокторду SDS полиакриламиддик гелинен батыш блотуна өткөрүү электроблоттоо жолу менен ишке ашырылат. Бул протеиндерди гелден электрофорез кылып, нитроцеллюлоза мембранасына (батыш блот) өткөрүүчү эффективдүү жана тез ыкма.
02-сүрөт: Western Blot
SDS Page менен Western Blot ортосунда кандай айырма бар?
SDS Page vs Western Blot |
|
| SDS Page - гел электрофорез ыкмасы. | Western blot – бул аралашмадан белгилүү бир протеинди аныктоо үчүн мембранада аткарылуучу ыкма. |
| Колдонуу | |
| SDS барагы белокторду өлчөмүнө жараша бөлүүгө мүмкүндүк берет. | Western blot SDS баракчасынын гелинде белокторду анын үлгүсүн өзгөртпөстөн өткөрүп берүүгө жана белгилүү антителолор менен гибриддештирүүгө мүмкүндүк берет. |
| Кемчиликтер | |
| Белоктун денатурациясы, кымбаттыгы жана нейротоксиндик химиялык заттардын болушу бул техниканын кемчиликтери. | Бул ыкма көп убакытты талап кылат жана жакшы тажрыйбалуу жеке жана атайын көзөмөлдөнүүчү шарттарды талап кылат. |
Кыскача маалымат – SDS барагына каршы Western Blot
SDS бет жана western blot протеин анализине катышкан эки ыкма. SDS Page белоктун молекулалык салмагына жараша гелде оңой бөлүүгө мүмкүндүк берет. Western blot белгилүү бир протеиндин бар экендигин жана санын конкреттүү антителолор менен гибриддештирүү аркылуу тастыктоого жардам берет. Бул SDS Page менен western blot ортосундагы айырма.
