Брэдфорд менен Лоури протеининин анализинин негизги айырмасы Брэдфорд протеининин анализи Coomassie жаркыраган көк G-250 боекторунун жутулушуна негизделген, ал эми Лоури протеин анализи жез иондорунун (Cu+) иондорунун реакциясына негизделген. Фолин-Циокалтеу реагенти менен пептиддик байланыштарды кычкылдандыруу аркылуу пайда болгон.
Талдоо - үлгүнүн негизги функционалдык компоненттерин мүнөздөөгө жардам берген аналитикалык ыкма. Демек, анализ сапаттык же сандык тест болушу мүмкүн. Лабораториялык медицина, фармакология, экологиялык биология, молекулярдык биология, биохимия жана иммунология сыяктуу көптөгөн тармактарда мындай анализдер дайыма колдонулат. Брэдфорд жана Лоури протеин анализи үлгү эритмесинде протеин концентрациясын аныктоочу эки биохимиялык анализ. Эки анализ тең натыйжаларды берүү үчүн колориметрдик ыкмаларды колдонот.
Бредфорд протеин анализи деген эмне?
Брэдфорд протеин анализи протеин анализи үчүн тез спектроскопиялык аналитикалык процедура. Ал эритмедеги белоктун концентрациясын өлчөгөндө жогорку тактыкты көрсөтөт. Марион Брэдфорд бул процедураны 1976-жылы киргизген. Бул анализде жалпы реакция өлчөнгөн белоктордун аминокислота курамына негизделген. Башка сөз менен айтканда, Брэдфорд протеин анализи колориметриялык анализ болуп саналат. Бул Coomassie brilliant blue боёк колдонот. Демек, бул колориметриялык белок анализи боёктун сиңирүү жылышынан көз каранды. Coomassie brilliant blue G-250 үч форматта бар: катиондук (кызыл), аниондук (көк) жана нейтралдуу (жашыл). Кислоталуу шарттарда боёктун кызыл формасы көк түскө айланат. Бул белоктун байланышын тастыктайт. Эгерде белок жок болсо, анда эритме күрөң түстө калышы мүмкүн.
Сүрөт 01: Брэдфорд протеин анализи
Брэдфорд протеин анализи башка протеин анализдеринен айырмаланат, анткени ал белок эритмесинде болгон ар кандай химиялык кошулмалардын кийлигишүүсүнө азыраак кабылат. Бул кошулмаларга натрий, калий, глюкоза жана сахароза ж.б. кирет.
Лоури протеин анализи деген эмне?
Lowry протеин анализи - эритмедеги белоктун жалпы деңгээлин аныктоо үчүн колдонулган биохимиялык анализ. Оливер Х. Лоури бул реагентти 1940-жылы иштеп чыккан адам. Процедура эритмедеги протеин концентрациясына пропорционалдуу түстүн өзгөрүшү менен эритменин жалпы белок концентрациясын сүрөттөйт. Демек, бул да колориметрдик белок анализи.
Пептиддик байланыштардын кычкылданышынан пайда болгон жез иондорунун (Cu+) жана Фолин-Циокалтеу реагентинин ортосундагы реакция бул процедуранын негизин түзөт. Ошондой эле, бул реагенттин курамында фосфомолибди кислотасы жана фосфор-вольфрам кислотасы бар. Бирок, Лоури белок анализинин реакция механизми жакшы түшүнүлгөн эмес. Бирок ал цистеин, триптофан жана тирозин калдыктарын Фолин-Циокалтеу реагентинин калыбына келтирүү аркылуу кычкылданышын камтыйт.
02-сүрөт: Лоури протеининин анализи
Цистеиндин калдыктары Лоури протеининин анализинде байкалган абсорбенцияга салым кошот жана реакциянын натыйжасында жаркыраган көк молекула пайда болот; гетерополиялык молибден көк. Бул молекуланын кыскаруусу 660нмде абсорбенция менен өлчөнөт. Демек, Folin-Cioc alteu реактивин азайткан цистеин жана триптофан калдыктарынын концентрациясы эритмедеги протеиндин жалпы концентрациясын чыгарат.
Бредфорд менен Лоури протеин анализинин кандай окшоштуктары бар?
- Брэдфорд жана Лоури протеининин анализдери эритмедеги белоктун концентрациясын аныктайт.
- Эки ыкма тең колориметриялык ыкмалар.
- Ошондой эле эки ыкманын тең сезгичтиги жогору.
Бредфорд менен Лоури протеиндик анализинин ортосунда кандай айырма бар?
Брэдфорд жана Лоури протеин анализи эритмедеги протеин концентрациясын аныктоочу анализдердин эки түрү. Брэдфорд протеининин анализи Coomassie жаркыраган көк G-250 боёктун сиңирүү жылышына таянат, ал эми Лоури протеининин анализи пептиддик байланыштардын кычкылдануусунан пайда болгон жез иондорунун Фолин-Циокалтеу реагентинин реакциясына көз каранды. Ошентип, бул Брэдфорд менен Лоури протеин анализинин ортосундагы негизги айырма. Брэдфорд протеин анализи натыйжаны чыгаруу үчүн 15 мүнөттү талап кылат, ал эми Лоуэри протеин анализи жыйынтык чыгаруу үчүн 40-60 мүнөттү талап кылат. Ошентип, бул Брэдфорд менен Лоури протеин анализинин дагы бир айырмасы. Андан тышкары, Брэдфорд протеин анализи аминокислота курамына көз каранды, ал эми Лоури протеин анализи жарым-жартылай аминокислота курамына көз каранды. Демек, бул Брэдфорд менен Лоури протеин анализинин ортосундагы айырма.
Төмөндө инфорафикалык бөлүмдө Брэдфорд менен Лоури протеин анализинин ортосундагы айырмачылык жөнүндө кененирээк маалымат берилет.
Кыскача маалымат – Брэдфорд менен Лоури протеининин анализи
Талдоо – үлгүнүн негизги функционалдуу компонентин мүнөздөөгө колдонулган аналитикалык ыкма. Брэдфорд жана Лоури протеин анализи колориметриялык ыкмалар менен иштеген белок анализинин эки түрү. Брэдфорд жана Лоури протеининин анализдери эритмедеги белоктун концентрациясын аныктайт. Бирок, Брэдфорд менен Лоури протеин анализинин негизги айырмасы алар колдонгон колориметриялык техникада. Брэдфорд протеин анализи Coomassie жаркыраган көк G-250ди колдонот, ал эми Лоури протеин анализи жез иондорун (Cu+) иондорун жана Фолин-Циокалтеу реагентин колдонот. Андан тышкары, Брэдфорд ыкмасы Лоури протеин анализине караганда тез натыйжаларды берет. Бирок, эки ыкма тең өтө сезгич ыкмалар жана ар кандай заттардын кийлигишүүсүнө дуушар болушат.
