Негизги айырма – Нитроцеллюлоза менен PVDF
Western blotting - бул протеин үлгүсүндөгү белгилүү бир протеиндерди аныктоого жана сандык аныктоого мүмкүндүк берген ыкма. Техниканын ишенимдүүлүгү гелден белокторду сиңирүү үчүн туура мембрананы тандоодон көз каранды. Микропороздук мембраналардын ар кандай түрлөрү бар. Нитроцеллюлоза жана PVDF мембраналары - бул мембраналардын башка түрлөрүнөн өзгөчө атрибуттары үчүн изилдөөчүлөр тандаган эки мембрана. нитроцеллюлоза же PVDF ортосундагы тандоо, ошондой эле батыш Blotting дагы бир көйгөй болуп саналат. Нитроцеллюлоза да, PVDF да протеинди сиңирүү жөндөмүнө ээ. Нитроцеллюлоза менен PVDF мембранасынын ортосундагы негизги айырма, нитроцеллюлоза мембраналарынын антителолорду ажыратууга жана антителолорду кайра текшерүү үчүн мембрананы кайра колдонууга жөндөмү жок, ал эми PVDF мембраналарында сыйрып алуу жана кайра колдонуу жөндөмү жок.
Нитроцеллюлоза деген эмне?
Нитроцеллюлоза – целлюлозаны азот кислотасы менен иштетүү жолу менен өндүрүлгөн полимер жана молекулярдык биологияда, айрыкча түштүк, түндүк жана батыш тазалоо сыяктуу тазалоо ыкмалары үчүн микропороздук мембраналарды жасоо үчүн колдонулат. Нитроцеллюлоза мембраналарынын тешикчелеринин өлчөмдөрү 3төн 20 мкмге чейин. Нитроцеллюлоза микропороздук мембраналар мембрананын бетинде болуп жаткан иммунохимиялык реакцияны аныктоого жардам берет. Ошондуктан, нитроцеллюлоза мембраналар бат-бат протеиндерди иммобилизациялоо жана вестерн блоттингде белгилүү бир белокторду аныктоо үчүн колдонулат. Нитроцеллюлоза мембраналары гликопротеиндерди жана нуклеиндик кислоталарды да кыймылсыз кыла алат.
Нитроцеллюлоза мембраналары бир нече өзгөчөлүктөрдөн улам каптал агымын анализдөөдө артыкчылыкка ээ. Нитроцеллюлоза мембраналары белокторду жогорку концентрацияда сиңирет. Мембрананы нымдоо үчүн колдонулган эриткич нитроцеллюлоза мембранасынын белоктун сиңүүсүн азайтпайт. Нитроцеллюлоза мембраналары каалаган гел өлчөмүнө оңой кесилиши мүмкүн жана протеиндерди гелден мембранага электрдик же капиллярдык өткөрүү аркылуу өткөрөт. Нитроцеллюлоза жогорку байланыш потенциалы бар мембрана аркылуу протеиндердин тез агымын камсыз кылат. Нитроцеллюлоза иштетүүнүн жакшыртылган күчүн көрсөтөт. Нитроцеллюлоза мембранасынын дагы бир өзгөчөлүгү - аны эриткичсиз сууга туруштук берүүчү желимдер менен ар кандай пластикалык таянычтарга оңой чаптаса болот.
Сүрөт 01: Вестерн тазалоо үчүн нитроцеллюлоза мембранасы
PVDF деген эмне?
Поливинилиден дифторид (PVDF) - винилиден дифторидинин полимеризациясы аркылуу өндүрүлгөн фторполимер жана белокторду иммобилизациялоо жөндөмдүүлүгү жогору. Ошондуктан, PVDF жасалган microporous мембраналар белоктордун аралашмасынан белгилүү бир белокторду талдоо үчүн батыш тазалоо ыкмалары колдонулат. PVDF мембраналар да аминокислота талдоо жана белок секвенирлөө үчүн колдонулушу мүмкүн. Нитроцеллюлоза мембранасынын үстүндөгү PVDF мембранасынын эң маанилүү өзгөчөлүгү - бул антителолорду оңой эле ажыратып, кийинки антитело зонддору үчүн кайра колдонсо болот.
PVDF мембраналары нитроцеллюлоза мембраналарына караганда калыңыраак; демек, кайра пайдалануу учурунда зыянга туруктуураак. PVDF мембраналары өтө гидрофобдук болуп саналат. Ошондуктан, аларды колдонуудан мурун метанолго же изопропанолго чылап коюу керек.
Нитроцеллюлоза менен PVDF ортосунда кандай айырма бар?
Нитроцеллюлоза vs PVDF |
|
| Нитроцеллюлоза целлюлозадан турган полимер. | PVDF – винилидендифториддин полимеризациясынан алынган фторполимер. |
| Мембрананын тешикчелеринин өлчөмү | |
| Типтүү тешикчелердин өлчөмдөрү 0,1, 0,2 же 0,45μ | Типтүү тешикчелердин өлчөмдөрү 0,1, 0,2 же 0,45μm |
| Белокту байланыштыруу жөндөмдүүлүгү | |
| Нитроцеллюлоза 80-100 мкг/см протеинди бириктирүү жөндөмдүүлүгүнө ээ2. | PVDF протеинди байланыштыруу жөндөмдүүлүгү 170-200 мкг/см2. |
| Сезимталдуулук | |
| Бул PVDFге салыштырмалуу сезгичтиги төмөн. | Бул жогорку сезгичтикке ээ. |
| Төмөн экспрессияланган протеиндерди аныктоо | |
| Нитроцеллюлоза мембраналарынын сезгичтиги төмөн болгондуктан, ал аз экспрессиялуу белокторду аныктоо үчүн ылайыктуу эмес. | Бул жогорку сезгичтигинен улам аз экспрессиялуу белокторду аныктоо үчүн көбүрөөк ылайыктуу. |
| Фондогу ызы-чуу | |
| Мунун фондогу ызы-чуусу төмөн | Бул фондун ызы-чуусу жогору. |
| Белоктар менен өз ара аракеттенүүсү | |
| Белок молекулалары гидрофобдук өз ара аракеттенүү аркылуу нитроцеллюлоза мембраналары менен байланышат. | Белоктар PVDF мембраналары менен гидрофобдук жана дипольдук өз ара аракеттенүү аркылуу байланышат. |
| Мембрананын табияты | |
| Нитроцеллюлоза морт жана морт. Бирок нитроцеллюлозанын версиялары бар жана алар туруктуу. | PVDF бышык жана химиялык туруктуулугу жогору. |
| Сырттоо жана кайра колдонуу мүмкүнчүлүгү | |
| Нитроцеллюлоза сигналды жоготпостон чечүүдө жана кайра текшерүүдө кыйынга турат. | PVDF колдонмолорду кайра текшерүү жана иреттөө үчүн идеалдуу. |
| Жарык | |
| Нитроцеллюлоза төмөнкү молекулалуу протеиндерди аныктоо үчүн идеалдуу. | PVDF жогорку молекулярдык протеиндерди аныктоо үчүн ылайыктуу. |
| Башка Колдонуулар | |
| Нитроцеллюлоза нуклеиндик кислоталарды анализдөө жана чекит/слотту тазалоо үчүн колдонулушу мүмкүн. | PVDF белок секвенирлөө жана катуу фазалык анализ системалары үчүн колдонулушу мүмкүн. |
| Баасы | |
| Бул PVDF мембраналарына караганда арзаныраак. | Бул нитроцеллюлоза мембраналарына караганда кымбатыраак. |
| Алдын ала нымдоо керек | |
| Нитроцеллюлоза мембраналары метанол менен алдын ала чылоону талап кылбайт | PVDF мембраналары метанол менен алдын ала чылоону талап кылат. |
Кыскача маалымат – Нитроцеллюлоза vs PVDF
Нитроцеллюлоза мембраналары каптал агымын анализдөө үчүн коммерциялык түрдө колдонулган биринчи мембраналар болгон. Алар белокторду сиңирүү жөндөмдүүлүгүнө ээ. Ошондуктан, нитроцеллюлоза мембраналар western blotting колдонулат. PVDF батыш blotting колдонулган мембрана дагы бир түрү болуп саналат жана ал ошондой эле жогорку протеин сиңирүү жөндөмдүүлүгүнө ээ. Эки түрү тең протеин талдоо үчүн western blotting колдонулат. Бирок, PVDF мембраналары көбүрөөк өзгөчө атрибуттарга ээ, бул аларды батыш blotting үчүн нитроцеллюлоза мембраналарына караганда ылайыктуу кылат. Бирок, нитроцеллюлоза мембраналары төмөн молекулалуу протеиндерди аныктоо үчүн көбүрөөк ылайыктуу, PVDF мембраналар жогорку молекулалуу салмактагы белокторду аныктоо үчүн көбүрөөк ылайыктуу. Бул нитроцеллюлоза менен PVDF мембраналарынын ортосундагы айырма.
