Негизги айырма – Phusion жана Taq Polymerase
ДНК полимеразалары молекулярдык биология техникасында кеңири колдонулган ферменттер жана ошондой эле ДНК репликациясынан өткөн бардык организмдерде табигый түрдө бар. Алар репликация учурунда катышкан негизги полимерлөөчү ферменттер. ДНК полимераза ДНК тилкесинин бош 3' учуна нуклеотиддерди кошууга жөндөмдүү, ошону менен жаңы тизмектин узартылышын шарттайт. Азыркы учурда молекулярдык биологиянын өнүгүшүнө байланыштуу ооруларды диагностикалоодо жана өнөр жайлык колдонууда ар кандай пайдалуу касиеттерге ээ полимераздарды өндүрүү маанилүү. Бул ыкманын тактыгын жогорулатып, аны тезирээк техникага айлантат. Phusion жана Taq полимераза атайын молекулярдык колдонмолордо колдонулган эки коммерциялык түрдө өндүрүлгөн термостабалдуу полимераз ферменттери. Phusion - бул Pyrococcus furiosusдан бөлүнүп алынган ДНК полимераза жана негизинен ишенимдүүлүктү жогорулатуу үчүн клондоштуруу эксперименттеринде колдонулат. Так ДНК Полимераза – полимераздык чынжыр реакциясында (ПЦР) колдонулган стандарттык ДНК полимераза жана ал термостубалдуу бактериядан бөлүнүп алынган; Thermus aquaticus. эки энзим ортосундагы негизги айырма булагы микроорганизм болуп саналат. Фузия экстремофилден, Pyrococcus furiosusдан, ал эми Так полимераза термофилден, Thermus aquaticusдан обочолонгон.
Фузия деген эмне?
Фузия ДНК полимеразасы – экстремофилдүү архея болуп саналган Pyrococcus furiosusдан ферментти бөлүп алуу жолу менен өндүрүлгөн жаңы полимераза. Бул микробдор өтө жогорку температуралык шарттарда жашашат, ошону менен полимеразаны ысыкка туруктуу полимеразага айлантат. Кадимки термостабилдүү полимеразага караганда өтө ишенимдүүлүктү алуу үчүн фузион полимераза колдонулат; Так полимераза. Phusion полимераза геномдук ДНКнын 7,5 кб чейин узун калыптарды күчөтүүгө жөндөмдүү. Phusion полимеразасынын оптималдуу полимерлөө жөндөмдүүлүгү 720 C. Phusion ошондой эле секвенирлөө, экспрессия анализи жана мутация анализи үчүн продукттарды клондоодо колдонулат.
Фузия ДНК полимеразасы 3' – 5' экзонуклеаза активдүүлүгүнө ээ. Бул синтезден кийин жаңы синтезделген жипти текшерүүгө мүмкүндүк берет. Демек, нуклеотиддердин дал келбестиктери оңой эле оңдолот. Ошентип, ал азыраак ката ставкасына ээ. Phusion полимеразанын жалпы артыкчылыктары;
- Өтө берилгендик
- Жогорку ылдамдык жана кыскартылган узартуу убактысы
- Чындуу реакциялар жана минималдуу оптималдаштырууну талап кылат
- Жогорку түшүм
01-сүрөт: Phusion
Фузион полимеразанын негизги кемчилиги - дезоксиуридинтрифосфаттын (dUTP) катышуусунда бөгөт коюу. Реакция аралашмасында dUTPs топтолгондо, ал Phusion полимеразанын иш-аракеттерин токтотушу мүмкүн. Бул ферментти кошуунун алдында реакция аралашмасын dUTPase менен дарылоо аркылуу алдын алат. Учурда бул көйгөйдү чечүү үчүн Phusion полимеразасынын ордуна Pfu Turbo деп аталган Phusion полимеразасынын dUTP туруктуу варианты колдонулат.
Так Полимераз деген эмне?
Так ДНК-полимераза ойлоп табуу молекулярдык биология тармагында революция жасады. Бул ДНКны күчөтүүдөгү негизги көйгөйдү чечти. Так ДНК полимеразасы - термофилдүү Thermus aquaticus бактериясынан алынган жана бөлүнүп алынган ысыкка туруктуу полимераз ферменти. Бул ферменттердин ачылышы ПЦРдин өнүгүшүнө алып келет. Бул энзим ДНКны күчөтүүдө кадимки көп клондоо ыкмаларынын ордуна полимераздык чынжыр реакциясын колдонууга мүмкүндүк берди. ПТР азыр молекулярдык диагностикада, айыл чарба жана өнөр жай тармактарында колдонулат жана техникага көптөгөн жаңы вариациялар кошулду.
02-сүрөт: Так полимераза
Taq ДНК полимеразасы 720C – 800C ортосундагы оптималдуу температура диапазонунда иштейт. Taq ДНК полимераза ко-фактор талап кылат; анын функциясы үчүн магний. Taq полимеразасы 3' – 5' текшерүү жөндөмүнө ээ эмес, ошондуктан Taq ДНК полимеразасынын катасынын деңгээли ДНК полимеразаларынын Фузия полимеразасы сыяктуу жаңы түрлөрүнө салыштырмалуу жогору. Бирок Taq ДНК полимеразасынын популярдуулугу энзимдин ыңгайлуулугу жана ийкемдүүлүгүнөн улам илим дүйнөсүндө бирдей.
Фузия менен Так полимеразанын кандай окшоштуктары бар?
- Фузион жана Так полимераза ферменттери экөө тең ДНК тилкесинин 3' бош учуна нуклеотиддерди кошууга жөндөмдүү полимерлөөчү ферменттер.
- Фузия жана Так полимеразалары полимеризацияны баштоо үчүн праймер ырааттуулугун талап кылат.
- Фусион жана Так полимеразалары тең ысыкка туруктуу.
- Фусион жана Так полимеразалары ДНКны күчөтүү үчүн ПТР механизмдеринде колдонулат.
- Реакция аралашмасына полимеразаны кошкондо, ферменттин эффективдүүлүгүн камсыз кылуу үчүн Phusion жана Taq полимеразалары эң акыркы болуп кошулат.
- Фусион жана Так полимеразалары молекулалык биологиянын эксперименталдык максаттары үчүн коммерциялык түрдө синтезделет.
- Фусион жана Так полимеразалары өз милдетин аткаруу үчүн кофакторду талап кылат.
Фузия менен Так Полимеразанын ортосунда кандай айырма бар?
Phusion vs Taq Polymerase |
|
| Phusion - бул Pyrococcus furiosusдан бөлүнүп алынган ДНК-полимераза жана негизинен ишенимдүүлүктү жогорулатуу үчүн клондоо эксперименттеринде колдонулат. | Так ДНК Полимераза – полимераздык чынжыр реакциясында (ПЦР) колдонулган стандарттуу ДНК полимераза жана ал термостубал Thermus aquaticus бактериясынан бөлүнүп алынган. |
| Организмдин булагы | |
| Фузия экстремофильдүү археядан алынган – Pyrococcus furiosus. | Бул адабий чыгармалар колонизация мезгилинен деколонизация мезгилине чейин камтылган. |
| Далилдеп окуу жөндөмү | |
| 3’ – 5’ далил окуу жөндөмү Phusion'да бар. | 3’ – 5’ далил окуу жөндөмү Taq полимеразасында жок. |
| Fidelity | |
| Phusion менен жогорку тактык бар. | Так полимеразы төмөн ишенимдүүлүктү көрсөтөт. |
| күчөтүү | |
| Phusion узун ДНК фрагменттерин көбөйтүүгө жөндөмдүү. | Taq полимеразасы бир кыйла кыскараак ДНК фрагменттерин күчөтүүгө жөндөмдүү. |
| dUTP уулануу | |
| Фузия аракети так топтоо менен бөгөттөлөт. | Так полимераза dUPT тарабынан бөгөттөлбөйт. |
Кыскача маалымат – Phusion vs Taq полимераза
Phusion жана Taq ДНК полимеразасы ПТР ыкмаларында колдонулган эки ысыкка туруктуу полимеразалар. Phusion - бул экстремофилден, Pyrococcus furiosusдан бөлүнгөн полимераз, ал эми Так термостурдуу Thermus aquaticus бактерияларынан обочолонгон. Taq ДНК полимераза ачылышы ПТР ойлоп табууга алып келет. Phusion Taqка караганда көптөгөн артыкчылыктарга ээ, бул Phusionди жогорку тактыктагы ДНКны өндүрүүдө жакшыраак вариант кылды. Бирок, Taq полимераза дагы эле ПТРде стандарттуу полимераз ферменти катары колдонулат. Бул Phusion менен Taq полимеразасынын ортосундагы айырма.
