BL21 менен DH5 Alphaнын негизги айырмасы BL21 протеаза жетишсиз гендик инженериядан жасалган компетенттүү E. coli клеткасы, ал эми DH5 Alpha генетикалык жактан инженерияланган компетенттүү E. coli клеткасы болуп саналат, ал эми recA1 мутациясына ээ. плазмиддик трансформация үчүн.
E. coli рекомбинантты протеин өндүрүү үчүн тандоо белгилүү организмдердин бири болуп саналат. Бул жылдар бою эң популярдуу экспрессия платформасы болуп калды. Ал ошондой эле клетка заводу катары колдонулат. BL21 жана DH5 Alpha эки генетикалык инженерия E. coli клеткалары учурда, тиешелүүлүгүнө жараша, белок экспрессия жана плазмид кайра үчүн колдонулат.
BL21 деген эмне?
BL21 протеазанын жетишсиздиги бар генетикалык жактан иштелип чыккан компетенттүү E.coli клеткасы, негизинен белоктун экспрессиясы үчүн колдонулат. E. coli BL21 - В штаммынан алынган бактериялык клетка. Бул Лон протеаза жана ompT тышкы мембраналык протеаза кемчиликтери бар. Ал көбүнчө рекомбинантты протеинди экспрессиялоо үчүн колдонулат, анткени ал, адатта, айтылган белокторго туруктуулукту алып келет. BL21 pCold I-IV ДНК жана pCold TF ДНКсы менен протеинди экспрессиялоо үчүн пайдалуу. Бирок бул компетенттүү E. coli клеткасы PET системасы сыяктуу T7 промоуторун колдонгон протеинди экспрессиялоо системасы үчүн арналган эмес. Мунун себеби BL21 T7 РНК полимеразаны билдирбейт. Кошумчалай кетсек, плазмидди курууда же даярдоодо колдонуу сунушталбайт, анткени ал река мутацияга ээ эмес.
01-сүрөт: BL21
BL21 биринчи жолу Студиер тарабынан 1986-жылы В линиясынын ар кандай модификацияларынан кийин сүрөттөлгөн. BL21 клеткаларында LON протеазасы жетишсиз, ал көптөгөн чет элдик протеиндерди бузат. Андан тышкары, сырткы мембраналык протеазаны (OmpT) коддогон дагы бир ген жок, анын функциясы клеткадан тышкаркы белокторду деградациялоо болуп саналат. Бул белоктордун жетишсиздиги E. coli BL21 клеткаларында чет элдик протеиндин ийгиликтүү өндүрүшүн шарттайт. Мындан тышкары, бул клеткалардагы hsdSB мутациясы бөтөн ДНКнын метилизациясын жана BL21 клеткаларындагы үзгүлтүктөрдү алдын алат.
DH5 Alpha деген эмне?
DH5 Alpha – бул гендик инженерияланган компетенттүү E. coli клеткасы, recA1 мутациясына ээ, ал биринчи кезекте плазмиддердин трансформациясы үчүн колдонулат. DH5 Alpha E. coli клеткалары трансформациянын эффективдүүлүгүн жогорулатуу үчүн америкалык биолог Дуглас Ханахан тарабынан генетикалык жактан иштелип чыккан. DH5 Alpha клеткасында үч башка мутация бар: recA1, endA1 жана lacZΔM15. recA1 бир чекиттүү мутация, ал глицин 160 менен recA полипептидиндеги аспарагин кислотасынын калдыктары менен алмаштырылат. Бул мутация рекомбиназалардын активдүүлүгүн өчүрөт жана гомологдук рекомбинацияны инактивациялайт. endA1 мутациясы клетка ичиндеги эндонуклеазаны инактивациялайт, бул анын киргизилген плазмидди деградациялоосуна жол бербейт.
02-сүрөт: DH5 Alpha
Мындан тышкары, lacZΔM15 мутациясы трансформацияланган клеткаларды ак-көк скринингге мүмкүндүк берет. Бул клеткалар компетенттүү клеткалар. Алар көбүнчө керектүү плазмидди киргизүү үчүн кальций хлоридинин трансформациясы менен колдонулат. Жакынкы изилдөөлөр тарабынан Ханахан ыкмасы менен DH5 Alpha клеткасы плазмиддик трансформация үчүн эң эффективдүү компетенттүү клетка экени аныкталган.
BL21 жана DH5 Alpha ортосунда кандай окшоштуктар бар?
- BL21 жана DH5 Alpha эки генетикалык инженерия E.coli
- Экөө тең компетенттүү клеткалар.
- Алар өзүнчө мутациялардан турат.
- Экөөнүн тең жаратылышы жок.
- Булар экспрессияны изилдөө жана клондоо процедуралары сыяктуу лабораториялык максаттар үчүн колдонулат.
BL21 менен DH5 Alphaнын ортосунда кандай айырма бар?
BL21 - протеазанын жетишсиздиги, генетикалык жактан иштелип чыккан компетенттүү E. coli клеткасы, негизинен, протеинди экспрессиялоо үчүн колдонулат. Башка жагынан алганда, DH5 Alpha генетикалык жактан иштелип чыккан компетенттүү E. coli клеткасы, recA1 мутациясына ээ, биринчи кезекте плазмиддердин трансформациясы үчүн колдонулат. Ошентип, бул BL21 жана DH5 Alpha ортосундагы негизги айырма. Мындан тышкары, BL21 E. coli клеткасында recA1 мутациясы жок, ал эми DH5 Alpha E. coli клеткасында recA1 мутациясы бар.
Төмөнкү инфографикада BL21 менен DH5 Alpha ортосундагы айырмачылыктар таблица түрүндө келтирилген.
Кыскача маалымат – BL21 жана DH5 Alpha
E. coli патогендик эмес штаммдары генетикалык жактан илимпоздор тарабынан лабораториялык экспрессияны изилдөө жана клондоо максатында иштелип чыккан. BL21 жана DH5 Alpha эки генетикалык инженерия E. coli клеткалары болуп саналат. BL21 биринчи кезекте белок экспрессия изилдөө үчүн колдонулат. Башка жагынан алганда, DH5 Alpha, биринчи кезекте, плазмидди өзгөртүү максатында колдонулат. Ошентип, бул BL21 менен DH5 Alpha ортосундагы айырманын корутундусу.
