Негизги айырма – ДНК менен РНКны экстракция
ДНК менен РНКны изилдөө молекулярдык биологиянын, биотехнологиянын жана генетиканын негизги түшүнүктөрүн түшүнүү үчүн маанилүү аспект болуп саналат. Бул изилдөөлөр учурунда эксперименталдык процедураларды жүргүзүү үчүн таза ДНК жана РНК үлгүлөрүн алуу зарыл. ДНК менен РНК экстракциясынын ортосундагы негизги айырма, ДНК экстракция процесси ДНКны тазалайт, ал эми РНК экстракциясы РНКны тазалайт. ДНКны экстракциялоо процесси үч түрдүү баскычтан турат: клетка лизиси жана мембраналык липиддердин жана белоктордун катаболизми, концентрацияланган туз эритмеси менен катаболиттердин топтолушу жана ДНКны этанол менен чөктүрүүсү. Үч кадам процедурасы эки кошумча кадамдан турушу мүмкүн. РНКны тазалоо процесси төрт түрдүү баскычтан турат: клетка лизиси үчүн гуанидий тиоцианатын кошуу, рибонуклеазаларды камтыган белок денатурациясы, хлороформ менен фенолду кошуу менен РНКны бөлүү жана этанолду колдонуу менен чөкмөлөрдү жуу.
ДНК экстракциясы деген эмне?
ДНКны экстракциялоо – бул үлгүдөгү ДНКны тазалоо үчүн колдонулган физикалык жана химиялык процесс. ДНК казып алуу молекулярдык биология жана соттук илимдер контекстинде маанилүү аспект болуп саналат. Процесс үч негизги кадамдан турат. Алгач кызыккан клеткалар алынышы керек. Андан кийин, клетканы ачат жана ДНК менен бирге цитоплазманы ачыкка чыгарган клетка мембранасын бузуу үчүн клетка лизиси шартталган. Surfactants же башка жуугучтар протеазалар менен катаболизацияланган протеиндерди клетка мембранасынан липиддерди лиздөө үчүн колдонсо болот. Бул кошумча кадам. Клетка лизис болгондон кийин, катаболизацияланган молекулалардын топтолушу концентрацияланган туз эритмелери аркылуу жеңилдетилет. Андан кийин эритмени центрифугалоо жүргүзүлөт, ал калдыктарды ДНКдан бөлөт. Бул этапта дифференциацияланган ДНК клетка цикли учурунда колдонулган реагенттер жана туздар менен аралаштырылат.
01-сүрөт: ДНКны экстракциялоо
Аны андан ары тазалоо үчүн, төмөнкү кадамдарды колдонсо болот. Методдордун бири этанолду тумоо болуп саналат, ал муздай муздак этанолду бөлүнгөн ДНК үлгүсү менен аралаштырууну камтыйт. ДНК спиртте эрибейт жана ошону менен ДНК молекулаларынын биригишинен улам гранул пайда кылат. Натрий ацетаты бул процессте иондук күчтү жогорулатуу менен жаан-чачындын даражасын жогорулатуу үчүн кошулат. Бул үчүн этанолду чөктүрүүдөн тышкары, фенол-хлороформды экстракциялоо процесси да ишке ашырылышы мүмкүн. Бул ыкмада фенол үлгүдөгү протеиндерди денатурациялайт. Центрифугалангандан кийин денатурацияланган белоктор органикалык фазада калат, ал эми хлороформ менен аралашкан ДНК молекулалары суу фазасында болот. Хлороформ фенол калдыктарын жок кылат. Экстракция аяктагандан кийин, ДНК TE буферинде же өтө таза сууда эрийт.
РНК экстракциясы деген эмне?
РНКны тазалоо – бул РНКны биологиялык үлгүдөн тазалоо процесси. Клеткаларда жана ткандарда рибонуклеаза бар болгондуктан бул процесс татаалдашат. Рибонуклеаза ферменти РНКны тез бузууга жөндөмдүү. Рибонуклеазалардын химиялык табияты өтө туруктуу жана аларды инактивациялоо кыйын. Рибонуклеазаларды нейтралдаштыруу вариант болуп саналат. Бул фермент клеткаларда жана кыртыштарда бардык жерде кездешкендиктен, РНКны алуу үчүн атайын ыкмалар иштелип чыккан. Көптөгөн ыкмалардын ичинен кеңири таралган ыкма - гуанидиний тиоцинат-фенол-хлороформ экстракциясы.
02-сүрөт: РНК экстракциясы
Гуанидиний тиоцинат-фенол-хлороформды экстракциялоо ыкмасы центрифугалоого жана фазаларды бөлүүгө көз каранды. Центрифугалануучу аралашма суулуу үлгүдөн жана фенол менен хлороформдон турган сууга каныккан эритмеден турат. Центрифугадан кийин эритме нейтралдуу рН шарттарында (рН 7-8) жогорку суулуу фазадан жана төмөнкү органикалык фазадан турат. РНК суу фазасында болот. Органикалык фаза, адатта, фенолдо эриген белоктордон жана хлороформдо эриген липиддерден турат. хаотроптук агент (суу молекулаларынын ортосундагы суутек байланыштарын үзүү жөндөмүнө ээ болгон молекула) кошулат; бул гуанидиний тиоцианат деп аталат. Бул агент РНКны бузат жана клетка лизисине катышкан рибонуклеазаларды камтыган белокторду денатурациялоо жөндөмүнө ээ. Ошондой эле рибосомалык белоктордон рРНКны ажыратат. РНКны тазалоонун акыркы этабы этанол менен суулуу фазадагы чөктүрүүнү жууйт. РНКны суюк азот менен да тазалоого болот.
ДНК менен РНК экстракциясынын кандай окшоштуктары бар?
- Экөө экстракция процессинде фенол жана хлороформ сыяктуу зыяндуу химиялык заттар колдонулат.
- Центрифугалоо эки процесс үчүн тең маанилүү ыкма.
- Этанол чөкмөлөрдү жууп, тазаланган ДНКны же РНКны алуу үчүн колдонулат.
ДНК менен РНК экстракциясынын ортосунда кандай айырма бар?
ДНК жана РНК экстракциясы |
|
| ДНКны экстракциялоо – бул организмден же үлгүдөн ДНКны бөлүп алуу процесси. | РНКны экстракциялоо - бул үлгүдөгү РНКны бөлүп чыгаруучу процесс. |
| Кадамдар | |
| ДНКны экстракциялоо процесси эки кошумча кадам менен үч башка кадамдан турат. | РНКны бөлүп алуу процесси төрт түрдүү кадамдан турат. |
| Реагенттер | |
| ДНКны экстракциялоо үчүн беттик активдүү заттар, протеазалар (милдеттүү эмес), спирт, хлороформ, фенол, натрий ацетаты колдонулат. | Гуанидий тиоцианаты, хлороформ, фенол, этанол РНКны экстракциялоо үчүн колдонулат. |
Кыскача маалымат – ДНК менен РНК экстракциясы
ДНК жана РНК экстракциясы молекулярдык биологияны, генетиканы жана биотехнологияны изилдөө үчүн эксперименталдык процедуралардын маанилүү аспектилери болуп саналат. Эки процесс тең окшош реагенттерди камтыйт, бирок РНК экстракциясы рибонуклеазалардын активдүүлүгүн төмөндөтүүчү Гуанидий тиоцианат деп аталган атайын реагентти колдонот. Бул ДНК менен РНК экстракциясынын ортосундагы негизги айырма.
ДНКнын РНК экстракциясынын PDF версиясын жүктөп алыңыз
Сиз бул макаланын PDF версиясын жүктөп алып, шилтеме эскертүүсүнө ылайык оффлайн максаттарында колдоно аласыз. Сураныч, PDF версиясын бул жерден жүктөп алыңыз ДНК менен РНКнын ортосундагы айырма
