Сахароза градиенти менен сахароза жаздыгын ультрацентрифугалоонун негизги айырмасы сахароза градиентинин ультрацентрифугасында үзгүлтүксүз сахароза градиенти колдонулат, ал эми сахароза жаздыкчасынын ультрацентрифугасында үзгүлтүктүү сахароза градиенти колдонулат.
Сахароза градиенти жана сахароза жаздыкчасын ультрацентрифугалоо макромолекулалардын белгилүү түрлөрүн бөлүү үчүн колдонулган эки окшош ыкма. Эки ыкмада тең сахарозанын тыгыздыгы градиент колдонулат. Бирок сахароза градиентинин ультрацентрифугасында үзгүлтүксүз тыгыздык градиенти колдонулат, ал эми сахароза жаздыкчасынын ультрацентрифугасында үзгүлтүксүз тыгыздык градиенти колдонулат.
Сахароза градиентинин ультрацентрифугасы деген эмне?
Сахароза градиенттүү ультрацентрифугалоо – бул ДНК, РНК жана белоктор сыяктуу макромолекулаларды фракциялоо үчүн колдонула турган ыкма. Бул техникада бир нече кадамдар бар. Алар сахарозаны градиент даярдоо, центрифугалоо, бөлүү жана элюция. Градиент даярдоо бул техниканын негизги кадамы болуп саналат. Бул ыкмада, ар кандай өлчөмдөгү макромолекулаларды камтыган үлгү сахароза градиент мамычасынын бетине катмарланат. Центрифугалоодо ар кандай өлчөмдөгү макромолекулалар сахарозанын градиент мамычасынан ар кандай ылдамдыкта чөктүрүшөт. Седиментация бир нече факторлордон көз каранды, анын ичинде центрифугалоо күчү, өлчөмү формасы жана макромолекулалардын тыгыздыгы, градиенттин тыгыздыгы жана илешкектүүлүгү. Центрифугалоонун аягында макромолекулалар тыгыздыгы боюнча мейкиндикте бөлүнөт. Чоңураак макромолекулалар (жогорку тыгыздыктагы макромолекулалар) түбүн көздөй чөктүрүшөт. Жеңилирээктери (тығыздыгы төмөн макромолекулалар) градиенттин жогору жагында калат. Демек, молекулалар ар кандай тилкелер катары бөлүнүшөт. Андан кийин тилкелер бөлүнүп, спецификалык макромолекуланы сахарозадан тазалоо керек.
01-сүрөт: Сахароза градиентинин ультрацентрифугасы
Колдонуу жагынан бул ыкма ДНК молекулаларын фракциялоо үчүн кеңири колдонулат. Сахароза градиентинин ультрацентрифугасы көбүнчө белок комплексинин өлчөмүн жана курамын мүнөздөш үчүн колдонулат. Мындан тышкары, бул ыкма мРНКны жарым-жартылай тазалоо үчүн колдонулат.
Сахароза жаздыкчасынын ультрацентрифугасы деген эмне?
Сахароза жаздыкчасын ультрацентрифугалоо макромолекулаларды бөлүүгө мүмкүндүк берген дагы бир ыкма. Сахарозанын тыгыздыгынын градиентинин ультрацентрифугалоосунан айырмаланып, сахароза жаздыгынын ультрацентрифугасы үзгүлтүктүү тыгыздык градиентин колдонот. Сахарозанын концентрациясы дискреттик кадамдар менен жогорудан ылдыйга жогорулайт. Бул ыкмада бөлүү тазаланган экстрактты сахароза жаздыкчасы деп аталган центрифугалык түтүкчөдөгү сахароза эритмесинин кичинекей көлөмүнүн үстүнө коюу аркылуу ишке ашат. Бул жогорку ылдамдыкта центрифугалоодо жакшыраак бөлүүгө мүмкүндүк берет. Молекулалар сахароза жаздыгынын ортосундагы тилке катары бөлүнгөндө, ак тилке чогултулуп, тазаланышы мүмкүн. Мындан тышкары, аралашмалар сахароза жаздык ыкмасын колдонуу менен дагы жок кылынышы мүмкүн. Сахароза жаздык ыкмасы пробанын 60-70% үлгү менен толтурууга мүмкүндүк берет. Демек, сахароза жаздык ыкмасы үлгүнүн көбүрөөк көлөмүн иштетүүгө мүмкүндүк берет.
Сахароза градиенти менен сахароза жаздыгынын ультрацентрифугасынын кандай окшоштуктары бар?
- Сахароза градиенти жана сахароза жаздыгын ультрацентрифугалоо макромолекулалардын аралашмасын бөлүү үчүн колдонулган эки ыкма.
- Эки ыкмада тең сахароза градиенти колдонулат.
- Центрифугалоо эки ыкмада тең кадам болуп саналат.
- Молекулалар ар бир ыкмада тилке же зонага түшөт.
Сахароза градиенти менен сахароза жаздыгынын ультрацентрифугасынын ортосунда кандай айырма бар?
Сахароза градиентинин ультрацентрифугасы центрифуга түтүгүндөгү үзгүлтүксүз сахароза градиентин колдонгон ыкма, ал эми сахароза жаздыкчасынын ультрацентрифугасы үзгүлтүксүз сахароза градиентин колдонгон ыкма. Ошентип, бул сахароза градиенти менен сахароза жаздыгынын ультрацентрифугасынын ортосундагы негизги айырма.
Мындан тышкары, сахароза жаздыкчасын ультрацентрифугалоо үлгүнүн көбүрөөк көлөмүн иштетүүгө мүмкүндүк берет, ал эми сахароза градиенттүү ультрацентрифугалоо үлгүнүн салыштырмалуу аз көлөмүн иштетүүгө мүмкүндүк берет.
Төмөндө инфографикада сахароза градиенти менен сахароза жаздыгынын ультрацентрифугасынын ортосундагы көбүрөөк айырмачылыктар келтирилген.
Кыскача маалымат – Сахароза градиентине каршы сахароза жаздыгынын ультрацентрифугасы
Сахароза градиентинин ультрацентрифугасы үзгүлтүксүз сахароза градиентинин жардамы менен макромолекулаларды бөлөт. Ал эми, сахароза жаздыкчасын ультрацентрифугалоо аралашмадагы бөлүкчөлөрдүн белгилүү бир түрүн бөлүп алуу үчүн үзгүлтүксүз сахароза градиентин колдонот. Ошентип, бул сахароза градиентинин жана сахароза жаздыгынын ультрацентрифугасынын ортосундагы негизги айырма. Сахароза жаздыкчасынын ыкмасы морфологиялык жактан бузулбаган бөлүкчөлөрдү чогултууга мүмкүндүк берет, анткени ал молекулаларды түтүктүн түбүнө майдалай турган сахароза градиентинин ультрацентрифугасынан айырмаланып, механикалык стрессти жаратпайт. Мындан тышкары, сахароза жаздыкчасын ультрацентрифугалоо сахароза градиентине караганда үлгүнүн көбүрөөк көлөмүн иштетүүгө мүмкүндүк берет.
