Элиза менен Элиспоттун негизги айырмасы Элиза ферментке байланышкан иммуносорбент анализи болуп саналат, ал секрецияланган сигнал берүүчү протеиндердин жалпы концентрациясын аныктайт, ал эми Элиспот жекече цитокиндерди бөлүп чыгаруучу клеткаларды аныктаган ферментке байланышкан иммуносорбент анализи.
Элиса жана Элиспот - медицинада, өсүмдүктөрдүн патологиясында, биотехнологияда жана ар кандай фармацевтикалык тармактарда кеңири колдонулган ферментке байланышкан иммуносорбенттик эки анализ. Бул ыкмаларда протеин аналити ага каршы багытталган антитело тарабынан аныкталат. Элиза лабораторияларда колдонулган эң популярдуу иммуносорбенттик анализ. Башка жагынан алганда, Элиспот - бул Элизанын ордуна колдонулган эмес, лабораторияларда Элизага кошумча колдонулган ферментке байланышкан иммуносорбент.
Elisa Assay деген эмне?
Elisa - ферментке байланышкан иммуносорбент анализи, ал бөлүнүп чыккан сигнал берүүчү протеиндердин жалпы концентрациясын аныктайт. Бул 1971-жылы Энгвалл жана Перлман тарабынан биринчи жолу сүрөттөлгөн кеңири колдонулган аналитикалык биохимиялык анализ. Бул ыкма ушул спецификалык протеинге каршы багытталган антителолорду колдонуу менен суюк үлгүдөгү белгилүү бир белоктун бар экенин аныктоо үчүн энзим иммуноанассасынын катуу фазалык түрүн колдонот. Бул анализ медицинада, өсүмдүктөрдүн патологиясында жана биотехнологияда кеңири колдонулган диагностикалык курал.
ELISA тестинин механизми
ELISA тестинин көпчүлүгүндө антигендин белгисиз көлөмү башында катуу таянычка (микролитрдик пластинка) иммобилизацияланат. Андан кийин дал келген негизги антитело катуу колдоо бетине колдонулат. Бул антитело антиген менен комплексти (антиген-антитело комплекси) түзөт. Антиген менен байланышкан биринчилик антитело биоконъюгация аркылуу ферментке байланышкан экинчилик антитело тарабынан аныкталышы мүмкүн. Элиза тестинин акыркы этабында ферменттин субстратын камтыган зат кошулат. Эгерде антигенге негизги антитело туура байланышса, субстрат тарабынан аныкталуучу түс өзгөрүүсү пайда болот. Акыр-аягы, бул үлгүдөгү антигендин санын аныктайт.
01-сүрөт: Элизанын ар кандай түрлөрү
Андан тышкары, Элизага карата түз Элиза жана кыйыр Элиза сыяктуу ар кандай ыкмалар бар. Учурда ар кандай Элиза тесттери кургак учук микобактериясы, ротавирус, гепатит В вирусу, гепатит С вирусу, E.coli, ВИЧ жана SARS-CoV-2 сыяктуу энтеротоксинди чыгаруучу козгогучтарды аныктоо үчүн колдонулат.
Элиспот анализи деген эмне?
Элиспот – бул цитокин бөлүп чыгаруучу клеткаларды аныктоочу ферментке байланышкан иммуносорбенттик анализ. Сесил Черкинский ELISpotти биринчи жолу 1983-жылы сүрөттөгөн. Бул бир клетка үчүн цитокин секрециясынын жыштыгын сандык өлчөөгө багытталган анализдин бир түрү. Ал ошондой эле биологиялык же химиялык протеин талдоочу аныктоо үчүн антителолор колдонгон ыкма катары классификацияланат. Fluorospot анализи - бир нече аналиттерди (жашыруун белокторду) талдоо үчүн флуоресценцияны колдонгон Элиспот анализинин вариациясы.
Элиспот тестинин механизми
Бул механизмде алгач микролитрдик плиталардын кудуктарына цитокиндик спецификалык моноклоналдык антителолор кошулат. Андан кийин байкалган каалаган клеткалар кудуктарга кошулат. Кийинчерээк клеткалар инкубацияланат. Клетка инкубациялоо учурунда клеткаларга ар кандай стимулдарга реакция жасоого жана цитокинди бөлүп чыгарууга уруксат берилет. Инкубацияланган клеткалар бөлүп чыгарган цитокиндер антителолорго жабышат, анткени клеткалар цитокинге мүнөздүү моноклоналдык антителолор менен курчалган.
02-сүрөт: Элиспот анализи
Бул цитокинге спецификалык моноклоналдык антителолорду аныктоо үчүн кудукка биотинилденген спецификалык аныктоочу антителолор кошулат. Биотинделген спецификалык аныктоочу антителолор скважиналардагы цитокинге спецификалык моноклоналдык антителолорду кармайт. Мындан тышкары, стрептавидин-фермент конъюгаттары аныктоочу антителолор менен байланышуу үчүн скважиналарга кошулат. Акыркы этапта скважиналарга белгилүү субстраттар кошулат. Ферменттик конъюгаттардын жана субстраттардын реакциялары скважиналарда так тактарды пайда кылат. Бул айырмаланган тактар автоматташтырылган ELISpot окугучунда окулат. Акыр-аягы, бул цитокиндерди бөлүп чыгаруунун жыштыгын дагы эсептейт.
Элиза менен Элиспоттун кандай окшоштуктары бар?
- Алар экөө тең ферментке байланышкан иммуносорбенттик анализдер.
- Эки анализ тең белгилүү протеин талдоочуларын аныктайт.
- Бул анализдер белок талдоочуларын аныктоо үчүн атайын антителолорду колдонот.
- Эки анализде тең ферменттер жана субстраттар колдонулат.
- Алар медициналык лабораторияларда диагностикалык курал катары колдонулат.
Элиза менен Элиспоттун ортосунда кандай айырма бар?
Elisa - ферментке байланышкан иммуносорбент анализи, ал бөлүнүп чыккан сигнал берүүчү протеиндердин жалпы концентрациясын аныктайт. Башка жагынан алганда, Элиспот - бул жеке цитокиндерди бөлүп чыгаруучу клеткаларды өлчөй турган ферментке байланышкан иммуносорбенттик анализ. Ошентип, бул Элиза менен Элиспоттун ортосундагы негизги айырма. Мындан тышкары, Элиза тестинде антиген алгач микролитрдик скважиналарга иммобилизацияланат. Ал эми Элиспот тестинде антитело адегенде микролитрдик кудуктарга иммобилизацияланат. Ошентип, бул Элиза менен Элиспоттун дагы бир айырмасы.
Төмөндөгү инфографикада Элиза менен Элиспоттун ортосундагы айырманын кеңири анализи таблица түрүндө берилген.
Кыскача – Элиза vs Элиспот
Элиса жана Элиспот - медицинада, өсүмдүктөрдүн патологиясында, биотехнологияда жана ар кандай фармацевтика тармактарында кеңири колдонулган ферментке байланышкан эки иммуносорбент. Элиза ченелүүчү лигандга каршы багытталган антителолордун жардамы менен суюк үлгүдөгү лиганддын (белоктун) бар экендигин аныктайт. Элиспот анализи иммундук жоопторду көзөмөлдөө үчүн кеңири колдонулган ыкма. Ал антителолордун жардамы менен цитокин бөлүп чыгаруучу клеткаларды аныктайт. Бул иммундук анализ жана биоанализ ыкмасы. Ошентип, бул Элиза менен Элиспоттун ортосундагы айырмачылыктын корутундусу.
