Негизги Айырма – T4 vs T7 ДНК Лигаза
ДНК лигаза молекулярдык биология техникасында колдонулган маанилүү энзим болуп саналат. Ал нуклеотиддердин ортосунда фосфодиэфир байланыштарын түзүү менен нуклеотиддерди бириктирүү үчүн молекулярдык клей катары кызмат кылат. Фосфодиэфир байланыштары кант бөлүгүнүн 3' гидроксил учу менен 5' акыры фосфат тобунун ортосунда түзүлөт. ДНК лигаза репликация процессинде, артта калган жиптин Оказаки фрагменттерине кошулуу үчүн жана ДНКны оңдоо механизмдери жана in vitro клондоо эксперименттери учурунда вектор геномуна кызыккан каалаган генге кошулуу үчүн абдан маанилүү. Учурда молекулярдык биологдор колдонгон эки негизги ДНК лигасы бар: T4 жана T7 ДНК лигазалары. T4 ДНК лигаза T4 бактериофагынан бөлүнүп алынган биринчи ферменттердин бири. T7 ДНК лигазасы, кичинекей белок, T7 бактериофагынан бөлүнүп алынган фермент. Бул T4 жана T7 ДНК лигазаларынын ортосундагы негизги айырма.
ДНК лигазасынын аракети кандай?
ДНК лигациясы үч баскычтуу реакцияда пайда болот. Биринчи кадам - бул АТФтин альфа-фосфоруна нуклеофилдик чабуул, коваленттик фермент-аденилат аралык продуктуну пайда кылуу, мында AMP лизиндин терминалдык каптал чынжыр азоту менен байланышкан. Экинчи кадамда 5'-фосфат менен аяктаган ДНК субстраты тарабынан фермент-аденилаттын фосфоруна нуклеофилдик чабуул пайда болуп, лизинди бөлүп чыгарат жана ДНК-аденилатты пайда кылат. Акыркы этапта ДНК-аденилат башка ДНК тилкесинин 3'- OH тарабынан чабуулга кабылып, АМФти бөлүп чыгарат жана полинуклеотиддерге кошулат.
T4 DNA Ligase деген эмне?
T4 Лигаза Meselson, Weigle жана Kellenberger тарабынан изоляцияланган жана аныкталган биринчи лигаза болгон жана биринчи коммерциялык лигаза болгон. T4 ДНК лигаза phosphodiester байланыш түзүлүшү катализдөө ATP көз каранды энзим болуп саналат. Бул 487 аминокислота калдыктары менен бир полипептиддик чынжыр жана болжол менен 77 кДа молекулалык салмагы бар. Анын активдүүлүгү үчүн оптималдуу рН 7,5 – 8 диапазонунда жатат.
01-сүрөт: T4 ДНК лигаза
T4 ДНК Лигаза, анын аты айтып тургандай, T4 бактериофагында бар жана фаг E. coli инфекциясын жуктурганда ферментти өндүргөндө бөлүнүп алынган. Фермент эки тилкелүү ДНКнын дуплекстерин туюк учтары менен байлайт жана бириктириле турган фрагменттер бири-бирине жакын болушу керек.
T7 DNA Ligase деген эмне?
T7 лигаза T7 Бактериофаг тарабынан өндүрүлгөн 41 кДа протеин жана E. coli клеткаларын жуктуруп обочолонгон. T7 лигазасынын негизги функциясы фосфодиэстер байланыштары аркылуу ДНК дуплекстерин байлап, клондоштуруу эксперименттери учурунда ДНКнын жакын фрагменттерин бириктирүү болуп саналат. T7 ДНК лигазасы үчүн оптималдуу рН 7.0 – 7.2 диапазонунда жатат. T7 ligase ATP көз каранды. T7 ДНК лигазалары, ошондой эле транскрипция учурунда анормалдуу конформацияларды пайда кылып, ДНК жана РНК гибриддерин күйгүзүүгө жөндөмдүү; бирок, бул көрүнүш дагы эле in vitro изилдөөлөрүндө изилденип жатат.
T4 жана T7 ДНК лигасынын кандай окшоштуктары бар?
- T4 жана T7 ДНК Лигаза ДНК фрагментинин 3' OH аягы менен 5' фосфаттык учундагы фосфодиэфирдик байланышты түзүү аркылуу ДНК дуплекстерин күйгүзүү аркылуу байлам реакциясына катышат.
- Эки фермент тең бири-бирине жакын турган ДНК дуплекстерин байлайт.
- Эки фермент тең ATPге көз каранды.
- Бул ферменттер E. coli клеткаларын конкреттүү бактериофаг менен жугузуу аркылуу бөлүнүп алынат.
- Эки ферменттин колдонулушу төмөнкүлөрдү камтыйт:
- Молекулярдык клондоштуруу – кызыктырган генди векторго байланыштыруу
- ДНКнын оңдоосу – кош тилкелүү никаларды оңдоо үчүн
- In vitro ДНК репликациясы
- Лигаза чынжыр реакциясы
T4 жана T7 ДНК лигасынын ортосунда кандай айырма бар?
T4 против T7 DNA Ligase |
|
| T4 ДНК лигаза түрү T4 бактериофагынан бөлүнүп алынган жана фосфодиэфир байланышын түзүү аркылуу чектеш ДНК фрагменттерин бириктирүүгө катышат. | T7 ДНК лигаза түрү T7 бактериофагынан бөлүнүп алынган жана фосфодиэфир байланышын түзүү аркылуу чектеш ДНК фрагменттерин бириктирүүгө катышат. |
| Белоктун өлчөмү | |
| T4 ДНК лигазасынын өлчөмү 77 кДа – T7 ДНК лигазасына салыштырмалуу чоңураак. | T7 ДНК лигазынын өлчөмү 41 кДа. |
| Оптималдуу pH | |
| T4 ДНК лигазында иштеген pH диапазону 7,5 – 8,0. | T7 ДНК лигазында иштеген pH диапазону 7.0 – 7.2. |
Кыскача маалымат – T4 vs T7 DNA Ligase
ДНК лигазалары кызыккан генди камтыган рекомбинантты ДНК молекулаларын өндүрүү үчүн молекулярдык клондоштурууга катышкан ферменттердин маанилүү классы. Лигация реакциясы - бул энергияны колдонуу реакциясы жана колдо болгон лигазаларды модуляциялоо аркылуу тактыкты жакшыртуу үчүн жаңы изилдөөлөр жүргүзүлүүдө. T4 жана T7 ДНК ligases молекулярдык биологиялык ыкмалары колдонулган маанилүү ДНК лигаза энзимдердин эки түрү болуп саналат. T7 ДНК лигазасы, ошондой эле T4 жуккан E. coliден бөлүнүп алынган баштапкы лигазага негизделген изилдөөлөрдүн натыйжасы. T7 кичинекей өлчөмүнөн улам өз милдетин аткарууда көбүрөөк натыйжалуу жана так сүрөттөлгөн. Бул T4 жана T7 ligase ортосундагы айырма.
T4 vs T7 DNA лигасынын PDF версиясын жүктөп алыңыз
Сиз бул макаланын PDF версиясын жүктөп алып, цитаталарга ылайык оффлайн максаттарында колдоно аласыз. Сураныч, PDF версиясын бул жерден жүктөп алыңыз T4 жана T7 Ligase ортосундагы айырма.
