Кленов фрагменти менен ДНК полимераза 1дин негизги айырмасы Кленов фрагменти ДНК-полимераза 1дин чоң бөлүгү болуп саналат, ал 5′тен 3′ чейин экзонуклеаза активдүүлүгүнө ээ эмес, ал эми ДНК полимераза үчөөнө тең E. coli ферменти болуп саналат. домендер, анын ичинде 5′ – 3′ экзонуклеаза активдүүлүгү.
ДНК полимераза тирүү организмдердеги ДНКнын репликациясына катышкан негизги ферменттердин бири. Өлчөмүнө жана формасына жараша эукариоттордо жана прокариоттордо табылган ДНК полимераза ферментинин ар кандай формалары бар. ДНК-полимераза 1, 2 жана 3 прокариоттук организмдерде гана кездешет жана алар ДНКнын репликациясында ар кандай роль ойношот. ДНК-полимераза 1 5′тен 3′′ полимеразага, 3′тен 5′ке чейин экзонуклеаза активдүүлүгү жана 5′тен 3′экзонуклеаза активдүүлүгүнө ээ үч доменге ээ. Кленов фрагменти ДНК-полимераза 1дин протеолиттик продуктусу. Ал бүтүн ДНК полимераза 1дин 5–3′ полимераза жана 3′–5′ экзонуклеаза активдүүлүгүнө ээ, бирок ага 5′–3′ экзонуклеаза активдүүлүгү жок.
Кленов фрагменти деген эмне?
Кленоу фрагменти ДНК-полимераза 1дин чоң бөлүгү. ДНК полимераза 1ден айырмаланып, Кленоу фрагментинде 5′ дан 3′ чейин экзонуклеаза активдүүлүгү байкалбайт, анткени ал 5′ дан 3′ алдыга карай экзонуклеаза домени жок. Кленов фрагменттери ДНК-полимераза 1ди протеазаны субтилизин деп аталган протеинди сиңирүү ферменти менен сиңирүү жолу менен өндүрүлөт. Кээ бир колдонмолордо Klenow фрагментинин 3′ 5′ экзонуклеаздык активдүүлүгү жагымсыз болуп калат. Аны Кленоу фрагментин коддогон генге мутация киргизүү аркылуу алып салууга болот. Натыйжада болгону 5′-3′ полимераза активдүүлүгүнө ээ болгон фермент экзо-Кленоу фрагменти деп аталат. Морфологиялык жактан Кленов фрагменти адамдын оң колун элестетет. Анын N-терминал 3′-5′ экзонуклеаза домени жана болжол менен 30 A менен бөлүнгөн C-терминал полимераз домени бар.
01-сүрөт: Кленов фрагменти жана ДНК полимераза 1
Klenow фрагменти молекулярдык биологиялык техниканын маанилүү куралы болуп саналат. Klenow фрагменттери бир нече колдонууга ээ. Алар тунук фрагменттерди алуу үчүн туюк клондоштурууда абдан маанилүү. Klenow фрагменттери 3′ ашыкчаларды жок кыла алат же 5′ ашкан жерлерди толтуруп, туюк учтарды түзө алат. Мындан тышкары, Klenow фрагменттери бир жипчелерден эки тилкелүү ДНКны синтездөө үчүн колдонулат. Мындан тышкары, алар 5’-3′ ДНКга көз каранды ДНК полимераза активдүүлүгүн колдонуу менен радиоактивдүү белги коюлган зонддорду даярдоо үчүн колдонулат.
ДНК Полимераза 1 деген эмне?
ДНК полимераза 1 (Pol 1) - бактериялык ДНКнын репликациясы үчүн зарыл болгон прокариоттордогу фермент. Бул 1956-жылы Артур Корнберг тарабынан ачылган ДНК полимеразанын биринчи түрү. Pol 1 E. coliдеги эң көп кездешкен полимераза. Ал poA гени менен коддолгон жана 928 аминокислотадан турат. Ал үч доменден турат. Бардык үч домен өзүнчө функцияларды аткарат. Эки домен 5′-3′ экзонуклеаза активдүүлүгүн жана 3′-5′ экзонуклеаза активдүүлүгүн аткарат. Пол 1 ээ болгон бул активдүүлүгүнөн улам, ал ДНКны репликациялоочу фермент эмес, ДНКны оңдоочу фермент катары популярдуу. Үчүнчү домен жаңы ДНКны толтуруу жана РНК праймерлерин алып салуу аркылуу ДНК шаблону жана Оказаки фрагменттерин бириктирүү алдында бир нече полимеризацияны (5′ – 3′) катализдөө мүмкүнчүлүгүнө ээ.
02-сүрөт: ДНК полимераза
E Coliден бөлүнүп алынган Pol 1 молекулярдык колдонмолордо кеңири колдонулган. Бирок, Taq Polymerase табылгандан кийин, ал ПТР технологиясында E Coli Pol 1ди алмаштырды. Taq полимераза - Пол 1ге таандык термостурдук ДНК полимеразанын бир түрү.
Klenow Fragment жана ДНК Полимераза 1 менен кандай окшоштуктар бар?
- Кленоу фрагменти ДНК-полимераза 1дин чоң бөлүгү.
- Алар 5'-3′ ДНКга көз каранды ДНК полимераза активдүүлүгүнө жана 3’-5′ экзонуклеаза активдүүлүгүнө ээ, алар текшерүүгө ортомчулук кылат.
- Алар бир нече максатта колдонулат.
Кленов фрагменти менен ДНК полимераза 1дин ортосунда кандай айырма бар?
Klenow фрагменти менен ДНК полимераза 1 ортосундагы негизги айырма Кленов фрагментинде 5′дан 3′′ чейин экзонуклеаза активдүүлүгү жок, ал эми ДНК полимераза 1де 5′дан 3′экзонуклеаза активдүүлүгүнө ээ. Демек, Кленов фрагменти эки доменге ээ, ал эми ДНК полимераза 1 үч доменге тең.
Төмөндө инфографика Кленов фрагменти менен ДНК-полимераза 1 ортосундагы айырманын кеңири деталдарын көрсөтөт.
Кыскача – Кленов фрагментине каршы ДНК полимераза 1
ДНК полимераза 1 – E. coli ферменти, анын 5′тен 3′ке чейин полимерлөө домени, 3′тен 5′кө чейин экзонуклеаза домени жана 5′тен 3′ чейин экзонуклеаза домени бар. Klenow фрагменти ДНК полимеразанын чоң бөлүгү болуп саналат. Ага ДНК-полимераза 1дин бир домени жок, ал 5′тен 3′ чейин экзонуклеаза домени. Кленов фрагменти менен ДНК полимераза 1 ортосундагы негизги айырма Кленов фрагменттери 5′дан 3′′экзонуклеаза доменине ээ эмес, ал эми ДНК полимераза 1де 5′дан 3′экзонуклеаза доменине ээ.
