BCA менен Брэдфорд анализинин негизги айырмасы - BCA анализи көп убакытты талап кылат жана так эмес, ал эми Брэдфорд анализи тез жана так.
BCA жана Брэдфорд анализи протеин концентрациясын аныктоонун эки анализ ыкмасы болуп саналат. Бул эки анализдин ар кандай анализ принциптери жана тактыгында айырмачылыктар бар.
BCA Assay деген эмне?
BCA анализи же бицинхонин кислотасынын анализи - эритмедеги белоктун жалпы концентрациясын аныктоодо пайдалуу биохимиялык анализ. Бул ыкма ошондой эле анын ойлоп табуучусу Пол К. Смиттин атынан Смит анализи деп аталат. Бул аналитикалык ыкма Лоури протеин анализине, Брэдфорд протеин анализине же биурет реагентине окшоштуктарды көрсөтөт. Биз берилген үлгүдөгү протеиндин жалпы концентрациясын жашылдан кызгылт түскө чейин өзгөргөн үлгү эритмесинин түсүнүн өзгөрүшү аркылуу байкай алабыз. Бул түстүн өзгөрүшү протеиндин мазмунуна жараша болот. Андан кийин түстүн интенсивдүүлүгүн жана үлгүдөгү белоктун мазмунун талдоо үчүн колориметриялык ыкманы колдоно алабыз.
BCA протеинди баалоо ыкмасы
BCA анализинин механизмин карап жатканда, типтүү BCA эритмеси 11,25 жакын рН менен өтө щелочтуу эритмени камтыйт жана бул эритмедеги ингредиенттерге бицинхонин кислотасы, натрий карбонаты, натрий бикарбонаты, натрий тартраты жана жез (II) сульфат пентагидрат. Бул анализ негизинен эки химиялык реакцияга көз каранды: белоктун пептиддик байланыштары аркылуу жездин (II) жезге (I) чейин кыскарышы жана бицинхонин кислотасынын эки молекуласынын жез (I) иону менен хелацияланышы, натыйжада кызгылт көк түстөгү комплекс пайда болот. 562 нм толкун узундугунда жарыкты жутуп алат. Биринчи реакцияда пептиддик байланыштар менен кыскартылган жездин (II) өлчөмү үлгүдөгү белоктун санына пропорционалдуу.
Бредфорд анализи деген эмне?
Брэдфорд анализи - эритмедеги белоктун концентрациясын өлчөө үчүн пайдалуу спектроскопиялык аналитикалык ыкма. Бул ыкма 1976-жылы Мэрион М. Брэдфорд тарабынан иштелип чыккан жана ал салыштырмалуу тез жана так ыкма.
Белок менен Брэдфорд реагентинин түстүү реакциясы
Биз бул ыкманы үлгүдөгү белоктун концентрациясын аныктоо үчүн колдоно алабыз. Бул анализ учурунда үлгүдөгү химиялык реакция үлгүдөгү белоктун аминокислота курамына гана көз каранды.
Бредфорддук протеинди баалоо ыкмасы
Бул анализдин ыкмасын карап чыкканда, бул Coomassie Brilliant Blue G-250 деп аталган боёктун сиңирүү жылышына негизделген колориметриялык белок анализи. Негизинен бул боёк аниондук (көк) формада, нейтралдуу (жашыл) формада жана катиондук (кызыл) формада үч формада болот. Ошондуктан, кычкыл шарттарда боёк түсүн кызылдан көккө өзгөртөт. Мунун себеби протеиндин боёк менен байланышы. Ал эми боёк менен байланыштыра турган белок жок болсо, түс өзгөрбөйт, эритме кызыл-күрөң түскө ээ болот. Бул боёк Ван дер Ваал күчтөрү жана электростатикалык тартылуу аркылуу белоктун карбоксил тобу менен күчтүү, коваленттүү эмес комплекс түзүүгө жөндөмдүү.
BCA жана Bradford Assay ортосунда кандай айырма бар?
BCA жана Брэдфорд анализи протеин концентрациясын аныктоонун эки анализ ыкмасы болуп саналат. Бул эки анализде ар кандай анализдин принциптери жана алардын тактыгы боюнча айырмачылыктар бар. BCA менен Брэдфорд анализинин негизги айырмасы, BCA анализи көп убакытты талап кылат жана так эмес, ал эми Брэдфорд анализи тез жана так.
Төмөнкү инфографика BCA менен Брэдфорд анализинин ортосундагы айырмаларды таблица түрүндө жалпылайт.
Кыскача маалымат – BCA vs Bradford Assay
BCA анализи же бицинхонин кислотасынын анализи - эритмедеги белоктун жалпы концентрациясын аныктоодо пайдалуу биохимиялык анализ. Брэдфорд анализи - эритмедеги белоктун концентрациясын өлчөө үчүн пайдалуу спектроскопиялык аналитикалык ыкма. BCA менен Брэдфорд анализинин негизги айырмасы - BCA убакытты талап кылат жана так эмес, ал эми Брэдфорд анализи тез жана так.
